为什么明明抗原抗体反应的最适温度是37℃,而许多免疫学实验却推荐在4℃孵育呢?

学术   2024-09-08 22:05   湖北  

抗原抗体反应要有合适的温度才有利于两者的结合,一般以15~40℃为宜,常用37℃。在一定范围内,温度升高可使分子运动加快,抗原与抗体碰撞机会增多,反应加速,抗原抗体容易结合,但也容易再解离,因为反应时间短,所形成的抗原抗体复合物结构较疏松。当温度高于56℃时,已结合的抗原抗体不仅容易再解离,还易变性或破坏。温度低时,分子运动慢,撞击机会少,反应时间长,但一旦结合就比较牢固,不易解离。某些特殊抗原抗体反应有其独特的最适反应温度要求,例如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好,20℃以上反而易解离。因此,抗原抗体反应时需根据实际情况选择合适的温度条件。

抗原抗体反应通常推荐在4℃孵育的原因

I.提高结合的稳定性:在较低的温度下,抗原和抗体的结合更加稳定,有助于形成更多的抗原抗体复合物,这对于检测弱阳性样本尤为重要。 
II.减少非特异性结合:低温孵育可以降低非特异性结合的可能性,从而减少背景信号,提高实验的特异性。 
III.增强抗体的亲和力:低温孵育有助于增强抗体的亲和力,使得抗体更有效地与抗原结合,这对于提高检测灵敏度至关重要。 
IV.适应实验条件:在某些实验中,如免疫荧光和Western Blot,推荐在4孵育以确保抗体充分渗透到组织切片或膜中,并与抗原充分结合。 
V.优化实验结果:全程在4下进行的实验,如使用自动化设备进行封闭、孵育、清洗和一抗回收,可以有效提高信噪比和相对灵敏度,产出高质量的结果。

来源:网络及爱吃洋芋的酸菜鱼。

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