超实用缓冲液配置指南!PBS、TBS、HEPES、ACES

学术   2024-10-29 15:10   湖南  

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1 、PBS缓冲液及其配置方法

PBS缓冲液是一种重要的生物化学缓冲液,广泛应用于蛋白抗体实验和生物学研究中。它能够维持生物分子的稳定性,是细胞培养、免疫印迹、免疫荧光等实验的理想选择。

配方(以1升PBS缓冲液的配置为例):

● NaCl(氯化钠): 8g

● KCl(氯化钾): 0.2g

● Na2HPO4(磷酸氢二钠): 1.44g

● KH2PO4(磷酸二氢钾): 0.24g

制备步骤:

● 在一个大瓶子或容器中,加入800ml去离子水。确保容器是干净的,无细菌和杂质。

● 分别称量8g氯化钠(NaCl)、0.2g氯化钾(KCl)、1.44g磷酸氢二钠(Na2HPO4)、0.24g磷酸二氢钾(KH2PO4)。

● 将氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾加入水中,搅拌均匀。

● 使用pH计检测溶液的pH值。PBS缓冲液的pH值应在7.2至7.4之间,如果不在这个范围内,可以适量加入氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)来调节pH值。

● 确保所有固体物质完全溶解,并且溶液是透明的。

● 最后,用去离子水将体积补足至1升(或500ml,根据需要),搅拌均匀。

● 用0.22微米的滤器过滤PBS缓冲液,以确保无菌。分装至小瓶中,用无菌技术保存,避免阳光直射和高温。

2、TBS缓冲液及其配置方法

TBS(Tris-Buffered Saline)缓冲液是一种常用的生化实验缓冲液,它被广泛用于生物化学和分子生物学实验中,包括免疫印迹、细胞培养和洗涤步骤。以下是TBS缓冲液的基本配方和制备方法,以500ml为例:

配方:

● Tris基(1 M,pH 7.4): 50ml(即0.5 M的Tris缓冲液,用于维持缓冲液的酸碱度)

● 氯化钠: 75g(即0.5 M的NaCl,提供缓冲液的离子强度)

● 去离子水: 400ml(用于溶解Tris基和NaCl)

制备步骤:

● 在500ml容器中加入400ml的去离子水。

● 加入50ml的1 M Tris基,搅拌均匀,直到Tris完全溶解。

● 逐渐加入75g的氯化钠(NaCl),搅拌至溶解。可以使用磁力搅拌器来加速溶解过程。

● 使用pH计检测溶液的pH值,如果需要,可以使用盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH至7.4。

● 最终体积不足500ml时,使用去离子水补足至500ml。

● 用0.22微米的滤器过滤缓冲液,确保无菌。

3、HEPES缓冲液

HEPES缓冲液常用于细胞培养和生物化学实验,特别是那些需要维持生物活性的实验。它的pH范围适中,不易被二氧化碳影响。

配方(1M,pH 7.4):

● HEPES(N-羟乙基哌嗪-2-乙磺酸):238.3 g

● 蒸馏水:将容量加至1 L

● 调pH至7.4:使用氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)调节pH值

制备步骤:

● 在适量的蒸馏水中加入238.3g HEPES(N-羟乙基哌嗪-2-乙磺酸)粉末。

● 搅拌混合,确保HEPES完全溶解。

● 使用氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)缓慢滴定,同时用pH计测量pH值,调至所需的pH(通常为7.4)。

● 将溶液体积加至1升,继续搅拌确保均匀混合。

● 使用滤器或经过膜过滤器过滤溶液,以确保缓冲液的纯净度。

4、ACES缓冲液

ACES缓冲液适用于酶反应等实验,因为它在酸碱条件下维持较为稳定的pH值。

配方(1M,pH 7.0):

● ACES:182.2 g

● 蒸馏水:将容量加至1 L

● 调pH至7.0:使用氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)调节pH值

制备步骤:

● 在适量的蒸馏水中加入182.2g ACES粉末。

● 搅拌混合,确保ACES完全溶解。

● 使用氢氧化钠(NaOH)或盐酸(HCl)缓慢滴定,同时用pH计测量pH值,调至所需的pH(通常为7.0)。

● 将溶液体积加至1升,继续搅拌确保均匀混合。

● 使用滤器或经过膜过滤器过滤溶液,以确保缓冲液的纯净度。
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