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1.保留时间
保留时间 (tR)为从进样开始到柱后出现组分浓度最大值所需的时间。溶质的流出时间与流动相流速成反比。
2.死时间
在色谱柱内不保留组分的流出时间为死时间 (t0),死时间不仅与柱结构有关,而且也与进样系统和检测系统有关。
估算公式:
柱死体积公式:(请注意:死体积包括管路体积+柱体积)
调整保留时间:(色谱柱相同,仪器不同时可以选用此参数进行比较)
容量因子:
3.柱效
色谱柱塔板数(N 值)公式:(长柱、低流速、小颗粒填料有助于提高 N 值。Wh是半峰宽,Wtan是峰宽)
4.分离度
相邻两峰的分离程度用分离度 R 来表示,两组分保留值之差与其平均峰宽值之比被定义为分离度:
5.单向阀
进口单向阀安在泵头底部,出口单向阀安在泵头上部,这样有利于气泡的排出。阀体是不锈钢的,里面装宝石小球,安在阀体进口端的是宝石座,在出口处接筛网,液流反向流时,球落入底座内,阻止液流反向流动。有的阀有两套球和阀座,可减少渗漏。(不锈钢单向阀可以超声,拆装请注意方向和里面的宝石。如果分不清进口单向阀和出口单向阀,可以记忆与液流方向相同,从下至上)
6.泵密封圈
密封圈的作用是使柱塞杆在泵头自由运动而流动相不漏出来。密封圈是由惰性材料如石墨掺和聚四氯乙烯粉等材料制成。(注意柱塞杆清洗液的高度变化,每次重新配置时,用笔标注液面高度。缓冲盐容易析出,所以柱塞杆清洗液一般以水为主,有机相为辅。垫圈损坏会引起渗漏,造成流动相流速不稳,保留值不重复。流动相渗透到泵机件内会腐蚀轴承和机件。垫圈的碎片堆积在柱头上或堵塞管道,会引起柱性能下降。)
7.四元低压泵
比例阀,几种不同的溶剂由比例阀控制各个溶剂进入低压混合室的量。低压混合使流动相脱气受到一定影响,因此用这种装置时脱气是至关重要的。低压混合仅需一个泵,费用低。(低压混合)
8.二元高压泵
高压混合是两个高压泵分别按照一定流速输出不同溶剂,流动相组分比例取决于每个泵的相对流速,混合后作为流动相进行洗脱。它也需要加静态或动态混合器,相对低压混合而言气泡影响小,但费用高。(高压混合)
9.峰宽
10.不锈钢管路或接头
适合高压,耐腐蚀、有精密的同轴度(管路记不住请帖标签,长度,内外径,用途。非仪器公司买的即工厂买的未经处理的管路或工业级管路,溶剂清洗顺序是:氯仿一甲醇一无水乙醇一水--1mol/L硝酸一水一甲醇一氮气流吹干。)
常见的管路堵塞位置在进样六通阀出口到色谱柱一段。先分段压力/流速测试,找到堵塞段,用适当的溶剂以约0.5mL/min 流速冲洗管路以清除堵塞物。对于不明堵塞物,用 50%的甲醇水溶液冲洗。如果是非刚性物质堵塞,如生物样品中的生化物质,蛋白质、微生物等,可用极细的金属丝导通,也可以在火头上烧一烧(确认这个管路不能再通开的时候),使有机物炭化,而后再导通。如果是刚性物质堵塞,要导通则十分困难,采用反冲的办法有时能成功,将管子调换方向直接与泵相连,利用仪器反冲清除堵塞物,注意不要连接色谱柱和检测器。不溶于流动相的密封圈碎片等堵塞物,上述冲洗过程可能不能清除。最后选择是将流速增加到3mL/min至5mL/min将堵塞物强行冲出,如果是溶剂中的杂质使管路堵塞,这样做会比较危险,为安全起见,使用这种方法时应保证废液管出口放置在封闭的烧杯或密封的废液瓶中。
11.PEEK管路或接头
适合低压,聚四氟乙烯是最好的可塑性管子,而且对液相色谱的化学试剂呈惰性。聚乙烯和聚丙烯管可用作放空管路(不能用做进液管)。四氟乙烯管使用前,以甲醇冲洗即可。(管路记不住请帖标签,长度,内外径,用途,管路和接头一定要拧紧,以防漏液或有死体积。注意:买接头/预柱/筛板的时候,需要看接头和色谱柱/系统等是否匹配,不同厂家可能会不同。注意不要滑丝!刚开始拧的时候用手。)
12.流动相互溶性
13.压力推算公式
14. 洗脱强度
反相色谱溶剂洗脱强度的强弱顺序:
水(最弱)<甲醇<乙睛<乙醇<四氢味喃<丙醇<二氯甲烷(最强)
(二氯甲烷和水不互溶)
正相色谱中,非极性溶剂强度弱 (如正已烷);极性溶剂强度大(如水)。正相色谱的溶剂由弱到强排列的顺序为:
正己烷 (含 1,1,2-三氟三氯乙烷)<氯仿<二氯甲烷<甲基叔丁醚<乙醚<四氢味喃<乙酸乙醋<乙睛<丙醇<甲醇<水。
参考:
色谱仪需维护与故障排除
编著吴方迪 张庆合
END
来源|网络资料整理