（图片来源：baotu）
顶尖药苑，韵味无穷，中药的魅力，神秘而灿烂。中药文化是中华民族优秀传统文化，是中华民族几千年来形成的对生命的认知、健康维护以及疾病防治的思想和方法体系。
目前国家大力推广中药，但是中药饮片以及中药制剂成百上千，相当多的中药品种只规定了性状、显微鉴别等检查项，无含量测定项，质量控制水平较低，产品临床疗效无法得到保障，限制了该产品的临床推广。因此制定准确的中药HPLC定量测定方法尤为重要，为提升中药品种的质量标准提供可靠依据。
中成药由于药材品种组成复杂，一般来说需要根据药材组成确定各药材的主要有效成分（可参照中国药典中各中药饮片的有效成分），然后针对各有效成分开发单独或同时的含量测定方法。下面我们就以藏药验方“三味檀香汤散”为例，介绍下这款中成药的含量测定方法开发过程。
三味檀香汤散
三味檀香汤散，记载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药: 第一册》和《四部医典》，由广枣、肉豆蔻、檀香3味中药材粉碎成细粉后直接入药制备，是藏医治疗心热病的常用验方，处方简单且临床疗效好。
但是三味檀香汤散在《部颁药品标准》中只规定了性状、显微鉴别以及参照 2020年版《中华人民共和国药典》通则的散剂检查，缺少含量测定项。安徽中医药大学药学院最新在《药物分析杂志》发表的《HPLC法同时测定藏药三味檀香汤散中主要指标成分的含量》有效解决了这个问题。
主要指标成分的选择
本方法根据《中国药典》中广枣、肉豆蔻药材规定的含量测定项，选择没食子酸和去氢二异丁香酚2种成分作为三味檀香汤散的主要指标成分。
含量测定条件选择
本研究采用紫外分光光度计进行全波长扫描 （190～700nm），结果显示没食子酸在270nm处有最大吸收，去氢二异丁香酚在274nm处有最大吸收，在270nm处也有较大吸收，最终选择 270nm作为检测波长。
本品的指标成分没食子酸的化学名称为3，4，5 －三羟基苯甲酸，多羟基成分极性较大，而去氢二异丁香酚的化学名称为4－（2，3－二氢－7－甲氧基－3－甲基－5－丙烯基－2－苯并呋喃基）－2－甲氧基苯酚，极性显著弱于没食子酸，根据 2020年版《中国药典》含量测定法，没食子酸和去氢二异丁香酚的液相测定需要采用不同的流动相，检测时间长达40min。
2个主要指标成分若单独分析，则需要配制不同极性的流动相，会增加进样次数、分析时间和实验成本，故本实验采用梯度洗脱的方式。同时对2个成分进行定量测定。对于检测时间的优化，本研究尝试缩短检测时间，结果发现加快流动相的梯度洗脱速度会导致基线漂移严重。
同时也比较了磷酸－甲醇溶液和醋酸－甲醇溶液分别作为流动相的色谱峰分离度，结果发现前者所得样品峰分离度显著优于后者，故最终选择磷酸－甲醇溶液作为流动相，分析时间为60min。后期将进一步通过调整流动相的组成等手段，继续优化梯度洗脱方法。
这篇论文选择了月旭Ultimate® XB-C18液相色谱柱，通过建立完善的方法学考察过程，考察了系统适用性，专属性试验，线性关系，检测限，定量限考察，精密度试验，重复性试验，稳定性试验和加样回收试验。
例：系统适用性及专属性试验
1.没食子酸 2.去氢二异丁香酚
混合对照品（A）、供试品（B）、
缺广枣阴性样品（C）、缺肉豆蔻阴性样品（D）
及空白（E）的HPLC图
阴性样品在对应的位置上无色谱峰，阴性无干扰，方法专属性良好。没食子酸、去氢二异丁香酚分别与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05，理论塔板数均大于3000。色谱系统适用性试验符合含量测定要求。
结论：
本研究建立了HPLC法同时测定三味檀香汤散中的指标成分没食子酸和去氢二异丁香酚，同时进行方法学验证，结果表明本方法科学、可行。同时，本方法的线性范围广，系统适用性、重复性、精确性良好，样品处理的方法稳定可行，可用于三味檀香汤散的质量评价，为本品的质量标准的提升提供参考。
作者：朱晗斐
排版：赵林
审核：夏微微
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