高效液相色谱法在医药诊断、食品安全、化学化工、环境监测、生物医学、法庭鉴定、科学研究、能源等领域都有着非常广泛的应用。
色谱柱是色谱技术的基石，柱相的选择直接影响着测试的效果。为解决各类不同样品的分析，色谱填料工程师们创造了种类繁多的键合相，比如C18、C8、苯基相、氨基相、手性固定相、体积排阻以及离子交换固定相等等。而在这么多不同种类的色谱柱中，C18的应用最为广泛。为保证色谱柱有效地、“健康”工作，正确的使用和维护就显得尤为重要。
“
色谱柱的活化
”
不同品牌的溶剂纯度常常有着很大的差异，因而会造成噪音的增加，基线的漂移增大，因此需要尽可能的置换掉保存溶剂。同时，色谱柱在保存过程中，可能因多种原因导致色谱柱填料干涸，在重新使用前，就需要先用色谱柱保存溶剂进行低流速润湿（即活化）后，才能正常使用。否则，轻则无法出正常峰，检测工作无法进行，重则因使用不当，导致色谱柱损坏。因此，如果出现填料干涸的情况，我们需要先将色谱柱进行活化。
1）新色谱柱在使用前，需先置换掉原色谱柱中保存溶剂。同时，在储存，运输过程中，两端堵头会发生松动，从而导致保存溶剂挥发，色谱柱两端干涸，这种情况下，需要按说明书进行活化，一般活化时间为1-4小时（具体以说明书为准）。
但色谱柱在进行前面的短时间活化后，峰形依然不正常，那就是色谱柱坏了吗？不是的，这种情况可能是填料干涸比较严重，短时间的活化无法使色谱柱填料充分润湿导致的。这种情况下，就需要延长色谱柱活化时间，一般用说明书的活化溶剂，以0.2-0.3mL/min的流速进行过夜活化就可以解决。
2）旧色谱柱就一定不需要活化吗？不是的，对于使用过的色谱柱，如果一个月以上没有再使用，保存溶剂也会有损失，特别是连在仪器上没有卸下来的色谱柱，一个星期以上就需要重新活化一下再进行使用。
那么，色谱柱活化需要注意哪些问题呢？
1）对于长时间未使用的或新开封的色谱柱：一般不建议直接用检测流速进行活化。需要先用低流速维持一段时间后，再缓慢提高流速，否则，很容易因瞬间的高流速损伤填料，使色谱柱损坏。
2）如从冰箱拿出的色谱柱或仪器处于高温状态时：一定要使色谱柱回到室温，柱温箱先降到室温，再连接色谱柱，否则，很容易因温度的瞬间差异过大，导致色谱柱损伤。
• 如色谱柱是在检测时发现峰形异常需要活化：在使用活化试剂前，一定要先用过渡流动相充分置换色谱柱内的溶剂，再用活化溶剂进行活化。
• 如反相色谱柱检测流动相中含有缓冲盐：在活化前，必须先用低有机相比例的流动相将缓冲盐完全置换后，再用活化溶剂进行活化。
“
C18色谱柱使用注意事项
”
1）检测使用的有机相需用色谱纯级别，水需用高纯水（或娃哈哈、屈臣氏等品牌的水），其他添加试剂也尽量使用色谱纯，优级纯，分析纯级别。
2）流动相在上机前，需先用0.45μm或更小孔径的膜进行过滤。需特别注意选择合适种类的过滤膜，比如，含有机溶剂的流动相，需要用有机膜（比如尼龙膜）进行过滤；切忌使用水型过滤膜（如MCE膜），否则溶解在有机相中的过滤膜将直接污染流动相，导致实验失败。
3）流动相一般需在24小时内使用。超过24小时的流动相可能会有微生物滋生，使用这种流动相，会污染色谱柱。
4）含缓冲盐的流动相（如磷酸盐），可先用过渡流动相（如10%甲醇）将C18色谱柱中的高比例有机相充分过渡后，再使用流动相，否则可能会因盐析堵塞色谱柱或液相色谱仪。检测结束后，也需先用过渡流动相充分置换掉流动相的中盐相后，再用高比例有机相进行冲洗保存。
5）如C18色谱柱需用到二氯甲烷等与水不溶的流动相，需先用与两相均能互溶的过渡试剂（如异丙醇）先将色谱柱充分过渡后，再更换检测流动相。
6）避免色谱柱温度的急速变化。如需使用较高柱温（如40℃），需先将色谱柱连接仪器并保持流动相流通后，再开仪器的升温系统，使色谱柱同仪器一起缓慢升温。使用结束后，也需先降低柱温后，再关流速，仪器。如色谱柱需冰箱保存，要完全恢复室温后，再放到冰箱中。同样，使用前需先从冰箱拿出，使色谱柱完全恢复室温后，再将色谱柱连接到仪器。
“
C18色谱柱的再生
”
在日常检测中，特别是检测中药样品时，色谱柱上会有各种强保留的成分吸附在色谱柱上，导致色谱柱被污染，柱压升高，柱效下降，峰形和分离度都变差。这种情况下，除了加保护柱外，还可以通过再生的方法，来维护和保养色谱柱。
1）中药及组分复杂样品引起的色谱柱污染：
将色谱柱反接（如检测流动相的pH值超过7，则不建议反接），按以下步骤进行冲洗：
使用10%有机相，将流动相中的缓冲盐相充分过渡掉 ➡ 再用纯乙腈1mL/min的流速冲洗30分钟 ➡ 用异丙醇0.2mL/min冲洗4小时以上（建议过夜）➡ 纯乙腈1mL/min的流速冲洗30分钟。
2）生物类样品，或贮存不当引起的微生物滋生导致的色谱柱异常。这种情况下，可以使用乙腈-水-TFA=50-50-0.1低流速过夜冲洗色谱柱。
作者：吴小梅
排版：赵林
审核：骆初平
如果您想了解更多内容，欢迎联系月旭科技销售人员或拨打400-810-6969服务热线，我们将竭诚为您服务。
推荐阅读
企业战略定位
中国领先的色谱填料、色谱耗材和仪器制造商
色谱分析和分离纯化整体解决方案供应商
色谱实验用品一站式供应商
企业文化
企业·使命
让公众的饮食健康更有保障
企业·精神
积极开拓进取，努力创造价值
企业·理念
极限的性能，合理的价格，最好的服务
企业·价值观
客户优先，团队至上
学习创新，攻坚克难
诚信尽责，红利共享
