（图片来源：baotu）
相信大家在日常色谱分析中，参考的标准方法、使用的色谱软件上会涉及一些时间概念，比如保留时间、调整保留时间、死时间、相对保留时间、延迟时间等，这些概念看着都是时间，差别却很大，还有的和时间完全没关系。
今天小编就和大家梳理下色谱分析中常见的几个时间概念。
保留时间（Retention Time）。指从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间，用RT、tR表示，常以分（min）为单位。如下图一中，组分的保留时间是10.0min。
图一
在色谱分析中，保留时间主要用于定性分析以识别目标组分。保留时间通常有一定的变化区间，比如流动相缓冲盐浓度、缓冲盐种类、流动相pH、流动相比例、柱温、基质效应等因素的微小变化，特别是对检测条件敏感的项目，或者分析复杂的样品，可能保留时间的微小变化也会影响相邻组分的分离。
在制备纯化中，保留时间的概念使用较少，因为制备色谱的上样量大，一般是过载的，组分的峰型通常是拖尾峰或圆头峰，其色谱行为偏离线性范围，再加上相邻组分的挤出效应，保留时间对制备色谱，基本没有指导意义。
死时间（Dead Time）。是指流动相（或溶剂）通过色谱柱的时间，即不被色谱柱固定相保留的组分的保留时间，用t0表示，如图二中，死时间是1.4min。
调整保留时间（Adjusted Retention Time）。某组分由于溶解（或者吸附）于固定相，比不溶解（或者不吸附）的组分在柱中多停留的时间称为调整保留时间，用t’R表示。
计算公式是：调整保留时间=保留时间-死时间，如图二中，组分的调整保留时间是8.6min。
图二
相对保留时间（Relative Retention Time，简称RRT）。它并不是一个时间单位。色谱分析中，样品组分保留时间的变化受很多因素影响，但是大多组分在一定范围内受到的影响，其变化趋势相同。为避免正常测试时，待测组分的峰被认错，通常会选择最不易被认错的峰（一般是已知结构和纯度的组分，或者含量较大的组分）作为参照，并计算其他峰的保留时间和参照峰的保留时间之比，其结果一般不受保留时间变化的影响。
延迟时间（Delay Time），是指从溶剂混合点（通常在液相色谱仪的混合腔内或比例阀中）到达色谱柱入口端的时间，主要取决于混合器和色谱柱间的溶剂混合器和连接管的死体积，也叫延迟体积，或者梯度延迟体积。
图三
延迟体积对于液相色谱分析的准确性和重复性的影响很大，特别是梯度洗脱条件。所采用的仪器配置，直接影响梯度洗脱时延迟体积的大小，从而影响方法的分离度、保留时间等。
延迟体积越大，改变梯度比例后流动相到达色谱柱入口端的时间就越长，尤其是在低流速下，组分出峰时间越慢，同时也会导致色谱峰展宽，降低灵敏度和柱效。
由于不同仪器的延迟体积不同，这种差异可能会影响梯度方法的重现，可能会对分离度及保留时间造成影响，进一步会影响方法转移或验证。
作者：李丽君
排版：赵林
审核：上官露露
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