（图片来源：baotu）
做色谱分析的小伙伴们都知道，反相色谱（RP-HPLC）是应用最为广泛的一种分离模式，它可以分析从低极性到中高极性的多数化合物，常用的键合相类型有C18、C8和苯基等。然而，反相色谱也有它的一个使用局限性：就是一些大极性化合物在常规反相中保留较弱，从而无法进行后续的定性与定量分析。
对此我们该采取什么样的办法呢？
（图源：soogif）
首先，最容易想到的是通过增加流动相中水相的比例以减弱洗脱强度，从而增加极性化合物的保留。一般来说，分析物的极性越大，流动相中水的比例也需要更高。那么问题来了，对于一些常规的C18柱在高比例乃至纯水相中耐受不好，很容易发生孔内干涸，也就是我们常说的“疏水塌陷”。一旦发生很容易出现色谱柱保留减弱等问题。
为什么纯水相中会发生疏水塌陷
最为大家接受的一种解释就是“固定相去湿”理论：
简单来说，就是因为100%的水相无法进入疏水填料的孔道。硅胶是全多孔球形填料，内部有各种微小孔道，疏水的C18长链是键合到孔里的。如果流动相是极性较弱的甲醇和乙腈等，那么很容易就能进入这些孔道，使填料润湿（如下图示）。
但如果流动相是纯水相，实验结束后，一旦流速停止，推动水溶液流动相进入硅胶孔隙的压力减小，由于疏水的固定相表面对水的排斥作用，会把孔内的水“挤”出孔外，发生孔内干涸。下次做实验时，由于水和疏水的固定相之间高的表面张力，无法进入孔道（如下图示）。硅胶球几乎所有的表面积都在孔内，如果硅胶表面未湿润，即“疏水塌陷”。也就意味着待测样品无法跟键合相接触，从而导致色谱柱保留性能的降低。
一般来说，孔径越小的C18柱（孔径<160Å)，越容易发生“疏水塌陷”，因为C18长链在孔内彼此舒展，为纯水相的通过所留有的间隙很小，即小孔更容易被C18长链“封锁”；而孔径较大的C18柱（孔径≥160Å)，不用担心发生“疏水塌陷”。
为解决小孔径C18柱不耐受纯水的问题，月旭科技的经典色谱柱Ultimate® AQ-C18应运而生。该色谱柱以极性官能团作为封端试剂，是一款耐100%水相的水性柱而不会出现“疏水塌陷”，在高含水量的流动相中能保持更长的使用寿命。
产品特点
● 采用纯度>99.999%的B型超高纯全多孔球形硅胶；
● 适度的表面覆盖率和完全封尾，使其与高含水量流动相具有很好的兼容性；
● 载碳量12%，孔径120Å，粒径3μm、5μm、10μm；
● 完美的峰形、更高的塔板数、适当的柱压。
在大极性化合物分析中的表现
有机酸在中草药和水果的叶、根、特别是果实中广泛分布，如乌梅、五味子等。它也常作为防腐剂和稳定剂被加入到食品和饮料中。通常使用HPLC对其进行质量分析和含量检测。然而，由于有机酸极性较强，在不添加离子对试剂情况下，需提高水相比例甚至100%纯水相，来增加其保留。此时，AQ柱便可大显身手。
应用案例一
四种有机酸测定
液相色谱条件
色谱柱：Ultimate® AQ-C18（4.6×250mm，5μm)
流动相：A：磷酸盐缓冲液；B：乙腈
柱温：30℃
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
梯度洗脱：
时间/min | A相/% | B相/% |
0 | 100 | 0 |
20 | 90 | 10 |
21 | 100 | 0 |
30 | 100 | 0 |
配方颗粒来源于中药饮片的水提物，可检出组分（如核苷、有机酸、水溶性维生素、生物碱等）极性较强。此时亦可考虑使用AQ-C18柱，可以从大比例或100%的水相开始进行梯度淋洗。
应用案例二
板蓝根颗粒含量测定
参考标准：中国药典2020版一部
色谱柱：Ultimate® AQ-C18（4.6×250mm，5μm)
流动相：A：水；B：甲醇
柱温：30℃
检测波长：254nm
流速：0.8mL/min
进样量：5μL
梯度洗脱：
时间/min | A相/% | B相/% |
0 | 97 | 3 |
3 | 97 | 3 |
20 | 90 | 10 |
40 | 30 | 70 |
50 | 30 | 70 |
50.1 | 97 | 3 |
65 | 97 | 3 |
温馨提醒：如果您使用普通C18色谱柱，偶尔做了高水相的方法，或者不小心用纯水冲了色谱柱，导致“疏水塌陷”，也不用太担心，这并不代表这支柱子从此就废了。使用高有机相冲洗一段时间，基本都可以将色谱柱恢复正常。例如：使用纯甲醇或纯乙腈0.1mL/min流速冲洗过夜，即可恢复色谱柱性能。
产品信息
货号 | 产品名称 | 规格描述 |
00207-31043 | Ultimate® AQ-C18 | 4.6×250mm，5μm |
00207-21043 | 4.6×250mm，3μm |
作者：肖留榜
排版：赵林
审核：朱晗斐
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