液相色谱的色谱泵吸滤头，进出口阀及管路（包括进样器和检测池）若被污染，应做清洗和钝化处理，先清洗再钝化。
清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢，清洗必须在钝化之前完成。钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜。
HPLC系统内部污染物可能来自实验人员触摸、暴露于实验室环境、仪器零部件上的残留物，或来自流动相和样品的残留。虽然系统自身可以通过流动相清洗，但某些释放出的杂质会吸附液相系统，从而降低总的性能。
那么怎么对高效液相色谱进行保养呢？一起来看看吧。
（图片来源：baotu）
01
液相色谱的酸清洗
通常使用30%磷酸水溶液清洗，具体操作：
1）取下色谱柱，改用两通连接。
2）用超纯水灌注泵头。
3）用30%磷酸水溶液以1mL/min的流速冲洗1h（UPLC降低流速增加冲洗时间）。
4）换成超纯水冲洗至出水口水pH显中性。
5）用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。
02
液相色谱的钝化
1. 钝化的目的
防止腐蚀：钝化层可以阻止金属与腐蚀介质接触，减少金属腐蚀速度。
增加耐久性：钝化层可以提高金属的耐久性和抗磨损性能，延长其使用寿命。
改善峰形：金属离子和待测物形成相互作用，会造成色谱峰消失或峰展宽。特别是对含有磷酸基团或羧酸基团的物质具有明显的峰形改善。钝化主要为了解决物质的拖尾问题。这些物质主要是极性阴离子的分析物，如含磷酸官能团的分析物，有机酸分析物，糖苷类物质和生物大分子（包含多肽，蛋白、核苷等）。
2. 钝化具体操作
1）取下色谱柱，改用两通连接，用纯水灌注泵头。
2）用6M硝酸水溶液以1mL/min的流速钝化1h（UPLC降低流速增加钝化时长）。
3）换成清水洗至出口水pH显中性。
4）用纯甲醇过渡，浸润泵头及管路，备用。
3. 如果钝化解决不了，那就解决残存的金属离子。解决思路有两个，一个是竞争金属离子，一个是消灭金属离子。
竞争金属离子的策略有：在流动相中加入EDTA或柠檬酸或亚甲基二磷酸，也可使用基质样品饱和管路，使用高浓度待测物饱和管路，酸化样品等都是可供尝试的策略。
注意在质谱系统中EDTA可能造成离子抑制，造成分析物的信号降低，亦可能在喷针尖端析出。
消灭金属离子最简单的就是替换掉金属管路：比如使用生物惰性仪器组件和色谱柱硬件（如月旭金刚石柱管色谱柱）等。
整体来看，使用生物兼容管路是防止蛋白类物质在仪器组件和色谱柱上吸附的最佳选择。如果不能在硬件上实现替换，一个可行的思路是使用Peak管路替换现有的金属流路，但需要注意系统耐压等。
作者：韩燕
排版：赵林
审核：邹天骏
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