在过去,细胞培养用的是天然培养基,就是一些组织的提取物或体液,因为它来自体内,各种参数都和体内环境比较像,像美国科学家Ross Granvlle Harrison,他就是利用悬滴法将一只青蛙胚胎的神经细胞种植在青蛙的淋巴液里来完成短时间的培养和观察。
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但显然这样的培养基批量制备的难度大,且无法做到批次稳定,随着细胞培养研究进入第二个历史阶段,一批可在体外增殖的细胞系被建立起来后,质量更稳定、生产效率更高的培养基需求就越来越高了。
此时,就出现了化学成分明确的培养基,例如MEM,一种由细胞生长所需要的最基础必须的、稳定的数种化学成分按照一定比例配制而成,再在使用前,往里面添加一些不稳定其他必要成分,例如血清、特定的氨基酸等,以此来支持细胞生长和增殖。
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而随着细胞培养技术的成熟,对其研究的要求越来越高,越来越多种类的培养基相继问世,甚至有不少培养基就是为了培养某种特定细胞而设计的。这些培养基的最终演化方向就是要尽可能的高度集成化,尽可能降低那些不可控因素,例如血清。
工业化的细胞生产中,就常用到无血清培养基,因为血清本身来自动物,而动物血清的批次差异是必然存在的,这对那些需要高度稳定的工业化生产来说是不可控的质量风险。
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目前,商品化的培养基有很多种,其成分配方也是公开且标准化的,这些培养基又以DMEM、MEM和RPMI1640的应用最为广泛。
✏️MEM,也叫低限量必须培养基,是从基础培养基BME发展而来的,它仅仅含有必须氨基酸、水溶性维生素、无机盐。
✏️DMEM是一种改良型的BME培养基,其氨基酸的浓度是MEM的2倍,微生物浓度是MEM的4倍,用于缓冲pH的盐离子例如碳酸氢根离子的浓度也更多,DMEM最初设计初衷是为了小鼠成纤维细胞的培养。
✏️RPMI1640是为淋巴样细胞的培养而设计的,其成分里缺乏钙离子,当然,拿RPMI1640培养贴壁细胞也不是不行,只是其更适合悬浮生长的细胞。
此外,F12、M199也是非常常见的培养基。
✏️F12培养基的营养成分种类比DMEM要多,但其营养成分的浓度比较低,适合克隆化的培养,DMEM则比较适合高细胞密度、大量增殖细胞的培养需求。
✏️M199的话则是一种含有丰富、全面维生素的改良型培养基,除了水溶性维生素外,也同时包括了所有的脂溶性维生素。
我们在养细胞的时候没有必要去记住更没有必要背这些培养基的特点,对其有个大致了解即可。因为如果你养的是细胞系,通常是可以沿用上一届或前辈培养该细胞的培养条件来继续养的,如果是买商品化的细胞,那就遵照企业提供的培养条件来养。
了解培养基的基本特点,是为了在培养中灵活变通,不至于换个条件就不知所措。
这里还截取了一份不同细胞的建议培养基和血清列表。有需要的同学可以自取。资料来自科学出版社的《动物细胞培养》。
以上是关于培养基在细胞培养中的一点小知识,如果大家在实验中遇到不明白的问题,或对文章中的内容存在疑问,欢迎在评论区留言,我会认真回复。
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