本期视频讲解了WB条带不理想的常见问题分析,特别是蛋白条带分子量不对的情况。
若条带分子量是预测值的二倍、三倍或四倍,可能是蛋白重新聚合,可通过加入新鲜DDT或B-琉基乙醇重新煮沸解决。
若条带分子量特别大,但目的蛋白分子量不大,且条带不规律增大,可能是发生了修饰,如磷酸化、乙酷化或糖基化。
处理样本时,应考虑糖基化问题,使用糖昔酶处理样本,去除糖基化。
若条带分子量低于预测值,可能是蛋白发生剪切或降解,或在提样本时超声条件过猛。
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