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康嘉乐, 李嘉华, 李志方, 等. 不同核酸提取方案对EB病毒核酸质量及扩增影响分析[J/OL]. 中华临床实验室管理电子杂志, 2024, 12(02): 80-85.
不同核酸提取方案对EB病毒核酸质量及扩增影响分析
康嘉乐, 李嘉华, 李志方, 陈荣彬, 何梦华, 魏洁
摘要
目的 通过比较不同核酸提取方法对EB病毒（EBV）-DNA检测的影响，探讨EBV-DNA检测的优化方案。方法 收集16例全血EBV-DNA阳性标本（EBV-DNA浓度>1000 copies/ml），分别用手工提取法、A品牌核酸提取仪（A机）和B品牌核酸提取仪（B机）提取全血核酸，检测各样本核酸浓度及A260/A280比值，分析不同提取法所得核酸质量，再采用荧光定量PCR检测EBV-DNA浓度，比较3种核酸提取法检测EBV-DNA的差异。为探究全血与血浆检测EBV-DNA的差异，对19例手工提取后检测结果为阳性的全血标本，用试剂盒配套的血浆提取方法手工提取其血浆核酸，采用荧光定量PCR检测EBV-DNA浓度。结果 16例全血EBV-DNA阳性样本经3种不同方法提取核酸后，手工提取核酸浓度均数为624 ng/μl，A机提取核酸浓度均数为141 ng/μl，B机提取核酸浓度均数为273 ng/μl。2种仪器提取法结果与手工提取法比较，均差异有统计学意义（A机P<0.05，B机P<0.01）。荧光定量PCR检测EBV-DNA浓度显示，手工提取全部为阳性，A机有4例未检测出阳性，B机有5例未检测出阳性。结果提示，低浓度EBV标本如采用该研究中的仪器提取核酸可能发生漏检。在同时检测全血与血浆的19例EBV-DNA阳性标本中，只有1例血浆阳性，全血样本EBV-DNA阳性率高于血浆样本，差异具有统计学意义（P<0.01）。经过以上验证，该单位EBV-DNA均使用全血标本通过手工提取法提取核酸进行检测。2021年1月至2022年12月共检测7945例EBV-DNA样本，阳性1160例，阳性率14.60%，与文献报告的阳性率基本符合。结论 不同核酸提取方法及标本类型对EBV-DNA检测结果存在明显影响。因此，在项目应用于临床之前应做好方法学比对，与临床协商选择合适的标本类型进行检测。项目进行过程中应对检测结果进行定期评价，为临床提供准确、有效的检测结果。
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