1506年，54岁的达芬奇完成了他著名的绘画《蒙娜丽莎》
画中女子端坐在扶手椅上，双臂交叉，展现出一种内敛的姿态。她的目光温和而坚定，仿佛在与观众进行无声的交流。
这幅画的英文标题是“Mona Lisa”，意思是“丽莎夫人”。蒙娜丽莎的真实身份至今仍未确定。不过，大多数研究人员认为，她就是丽莎·德尔·吉奥孔多，佛罗伦萨富有的丝绸商人弗朗西斯科·德尔·吉奥孔多的妻子。据说，这幅画是为庆祝他们的第二个儿子安德烈的出生，由夫妇二人委托达·芬奇为新家创作的。
蒙娜丽莎的微笑被称为“神秘的微笑”，因为它给人一种模棱两可的感觉。观众在不同的角度、不同的光线下观看她的笑容时，会产生不同的感受。有时，她的笑容显得温柔而亲切，而在另一些时候，她的表情却显得有些冷淡，甚至略带忧伤。这种变化被认为与达·芬奇所运用的独特绘画技法有关，例如“晕涂法”（Sfumato）。这种技法通过柔和的过渡和阴影，使得面部表情更加丰富和难以捉摸。
达·芬奇通过巧妙的处理嘴角的阴影，使蒙娜丽莎的微笑具有更强的表达力。他在嘴角周围放置了深浅不一的阴影，随着观察距离的增加，嘴角的轮廓变得模糊不清。此外，达·芬奇在嘴唇上方的左右两侧使用了非常柔和的阴影，以突出负责抬起嘴角的两块主要口腔肌肉——颧肌。虽然两侧肌肉的紧张程度相似，但右嘴角比左嘴角略微抬高。随着观察距离的变化，右嘴角的具体位置变得越来越模糊，而右侧颧骨周围的阴影在视觉上被补充，似乎形成了嘴角的延伸。因此，观众在不同距离观看时，会感觉蒙娜丽莎的微笑变得更加强烈。
