全面!国自然研究方案中关键技术总结得如此通透

文摘   科学   2024-11-09 11:46   上海  

巧妇难为无米之炊。工欲善其事必先利其器。

研究方案中“关键实验技术(手段)”的系统性学习和理解,将极大提升你对研究方案的把控能力和设计能力,运筹帷幄,决胜千里,以不变应万变。

例如你知道WB的实验目的是什么吗?难道只是检测表达水平?那么WB能定量计算蛋白丰度吗?如果能那为何又有ELISA这种技术?

技术之间有互补性

技术之间,是相互互补的,又不可替代,这需要进一步地理解和学习。理解关键实验技术(手段)的原理特点和实验目的,和可能的实验结论,有助于研究方案的创新和优化。

青椒医学给大家进行了总结,有不足之处请在留言区留言,协助我们更正:

1.检测RNA分子在组织和细胞空间分布和表达丰度的技术:活细胞动态RNA成像技术、单分子RNA FISH原位杂交、多分子RNA Scope原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合qPCR、单细胞测序技术、空间转录组技术、Northern blotdot blot等等;

2.检测蛋白分子的空间分布和表达丰度的技术:免疫荧光、免疫组化、细胞核-细胞质分离结合WBGFP标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等等;

3.检测DNA拷贝数、突变与否的技术:FISH原位杂交、qPCR、基因组测序等等。

4.检测某蛋白分子总的表达量(不含空间信息):ELISA技术(定量)、western blot技术(半定量,不准确);

5.检测某蛋白分子的分子量大小(不含空间信息):分子筛层析法、western blot技术、双向2D电泳、质谱分析等等;

6.检测某蛋白分子的高级结构信息:蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等等;

7.分子表达干预技术:分子克隆操纵表达技术、病毒载体过表达或者敲减表达(shRNAsiRNA)、点突变技术、CRISPR敲除或者敲入技术、CRISPRi沉默技术、功能区分段(truncate)敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等等;

8.体内水平探索分子功能:类器官、PDX模型、裸鼠皮下成瘤、各种XXX疾病动物模型、活体成像技术等;

9.细胞功能探索:细胞增殖、细胞周期检测、细胞衰老、细胞干性、细胞分化、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移、侵袭能力,表面受体表达等等;亚细胞结构的囊泡和细胞器的分离和电镜影像学观察;

10.分子间互作实验方法:RNADNA、蛋白之间的互作分析技术如下图;


11.新疾病分子、通路的寻找:蛋白质组学、代谢组学、全转录组测序、生物信息学分析等等;


关键技术上,也要量力而为,一定要符合本单位的硬件技术设施定位,且不可为了新而新,写一些天马行空,脱离实际的技术手段上去,评审专家也会提出质疑。


2023年度国自然医学部50大科研热点中标数统计如下:


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