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抗体下游纯化策略需根据抗体类型及其结构特性进行优化。以下是常见抗体类型的纯化策略及关键技术点：
1.单克隆抗体（mAb）
核心策略：
Protein A/G亲和层析：高效捕获，结合Fc区，去除大部分宿主蛋白（HCP）和核酸。 注意：不同IgG亚型对Protein A结合力不同（如IgG3较弱），可能需要调整洗脱pH或改用Protein G。 低pH病毒灭活：亲和层析后立即进行，灭活潜在病毒。 离子交换层析（IEC）： 阳离子交换（CEX）：结合模式下进一步去除聚集体和电荷变体。 阴离子交换（AEX）：流穿模式下去除DNA、HCP和内毒素。 分子排阻层析（SEC）：精纯步骤，去除聚集体，确保单体纯度。 切向流过滤（TFF）：浓缩和缓冲液置换，为后续制剂准备。
2.抗体片段（Fab、scFv、单域抗体等）
核心策略：
亲和标签层析：如His标签（金属螯合层析）、Flag标签或抗原亲和层析。 离子交换层析： 利用片段表面电荷差异，优化pH和盐浓度实现分离（如Fab片段pI通常低于完整抗体）。 疏水相互作用层析（HIC）：针对疏水性差异纯化，尤其在去除错误折叠片段时有效。 复合模式层析（MMC）：如Capto adhere，结合多种作用力提高分辨率。 SEC或TFF：去除聚集体及缓冲液置换。
3.双特异性抗体（BsAb）
核心策略：
亲和层析组合：若含Fc区仍可用Protein A，但需结合其他方法分离正确配对双抗。 Capto L亲和层析：特异性结合κ轻链，用于分离含不同轻链的双抗。 离子交换层析：利用电荷差异分离异源二聚体与同源二聚体。 pH梯度洗脱：优化CEX洗脱条件以提高分辨率。 SEC或AEX：去除聚集体和残留错配产物。
4.抗体药物偶联物（ADC）
核心策略：
疏水层析（HIC）：分离不同药物抗体比（DAR）的ADC，如苯基琼脂糖填料。 反相层析（RP-HPLC）：分析和小规模制备，去除未偶联药物。 TFF：缓冲液置换并浓缩，避免有机溶剂影响稳定性。 特异性去除步骤：如使用巯基柱捕获未偶联的毒素。
5.多克隆抗体（pAb）
核心策略：
混合亲和层析：Protein A/G/L组合，覆盖更多Ig亚型。 抗原亲和层析：特异性纯化目标抗体，但成本较高。 沉淀法：硫酸铵或辛酸沉淀初步富集IgG。 AEX流穿模式：去除酸性杂质（如白蛋白）。
6.IgM/IgA等大分子抗体
核心策略：
凝胶过滤层析（SEC）：分离单体与多聚体。 离子交换层析：高载量填料（如Fractogel）处理大分子。 羟基磷灰石层析：利用钙离子结合特性纯化IgM。 超速离心或TFF：去除聚集物并浓缩。
通用关键点
病毒清除：低pH孵育、纳米过滤（20 nm）、溶剂去污剂法。 去内毒素：AEX流穿模式或专用吸附剂（如EndoTrap）。 工艺强化：连续层析技术（如CaptureSMB）提高效率。 分析支持：HPLC（SEC、IEX）、CE-SDS、质谱监控关键质量属性（CQA）。
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