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▲肿瘤细胞转移
肿瘤细胞的转移是由一系列复杂的细胞生物学事件组成的，首先肿瘤细胞发生原位侵袭，随后内渗至血管中，存活在循环系统内，并随着循环系统转移至远处组织血管，外渗至其他组织器官中，形成转移灶继续生长，完成肿瘤细胞的转移。
▲Transwell实验
肿瘤细胞的侵袭是转移的第一步，Transwell实验即是用来检测细胞侵袭特性的实验，利用Transwell小室的半透特性可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种研究。通常将小室内称为上室，细胞培养板内称为下室，小室底部为聚碳酸酯微孔膜，在膜上铺有一层Matrigel胶（基质胶）。基质胶是从富含细胞外基质蛋白的小鼠肉瘤中提取的基质成分，主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原蛋白、巢蛋白和许多生长因子，基质胶在室温下会凝结成具有生物学活性的三维基质，可以模拟细胞外基质，与肿瘤细胞的体内转移类似，具有侵袭能力的细胞会分泌基质金属蛋白酶分解基质胶，并进一步向外转移。
▲ 基质胶
1.在冰上使用无血清培养基将基质胶按1:8左右的比例进行稀释，按100μL/孔加入上室，铺满小室底部，放入细胞培养箱中孵育1-4小时。
▲transwell板
2.轻轻吸出上室中多余的基质胶液体，加入使用无血清培养基重悬的细胞悬液200μL，并向下室加入完全培养基500μL，放回小室时注意不要产生气泡，将transwell板放回培养箱中继续培养24-48h。
3.弃去上室和下室的培养基，使用PBS清洗上室和下室各3次，用棉签将上室中未侵袭的细胞擦去。
▲Transwell小室
4.下室加入500μL多聚甲醛，放入小室固定30分钟，弃去多聚甲醛，晾干小室。
5.下室加入500μL结晶紫溶液，放入小室染色30分钟，弃去结晶紫溶液，使用PBS清洗干净染色液，晾干小室，即可进行显微镜观察及拍照。
▲染色后细胞图
6.每个小室随机选取5个视野进行拍照，使用软件或人工计数侵袭细胞数，计算5个视野的平均值。
1.基质胶应储存在-20℃以下的冰箱中，由于基质胶在室温会凝固且不可逆，在给小室铺基质胶前需将所用到的移液枪头、离心管、小室等提前一天放入4℃冰箱预冷，同时也将基质胶提前放入4℃冰箱解冻，并在使用时全程置于冰上，若单瓶的基质胶量较多建议按小量分装，避免反复冻融和凝固。
2.基质胶的稀释比例、接种的细胞量、培养的时间应根据穿膜细胞量进行调整，更大的稀释比例、更大的接种细胞量、更长的培养时间将使穿膜的细胞量增多，可设定几个梯度进行预实验，选取效果最好的操作参数，避免细胞量过多或过少影响实验结果。
3.培养完成后的小室固定、染色等操作应轻柔进行，切不可触碰小室下层，避免穿膜的细胞脱落，染色时间和清洗次数可根据染色结果进行调整，使细胞染色清晰可见的同时背景色较浅。
4.仅具有侵袭能力的细胞方可进行Transwell侵袭实验，即细胞可分泌基质金属蛋白酶，特别是MMP-2，可在实验前使用酶谱法进行检测确认，为了使实验效果更明显，可以将细胞在无血清培养基的条件下饥饿12-24h后进行实验。
5.Transwell小室的微孔膜有孔径之分，一般侵袭实验长采用8μm和12μm孔径的微孔膜，孔径越大细胞越容易穿膜。
6.若不在微孔膜上铺基质胶则为Transwell迁移实验，步骤与上文相同，但仅为检测迁移能力，常用与研究一种细胞对另一种细胞的趋化作用，或细胞对某种因子的趋化性，使用的孔径一般为5μm、8μm和12μm。
