2024年11月28-29日

北京创新药早期开发及CMC策略大会
展位号：A03

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实验动物是生命科学研究药物研发的重要支撑条件。广西华仁济瀛生物科技有限公司作为一家综合性实验动物机构，致力于为生命科学研究、CRO药效试验及药代动力学试验、医学成果转化提供实验动物和实验平台。

包括：五阴级食蟹猴、普通级食蟹猴、恒河猴、巴马小型猪、树鼩。匹配各类新药研发需求。

擅长构建多种非人灵长类动物的自发、药物诱导、手术模型。预先储备多种疾病模型动物（手术类除外），助力临床前实验快速高效开展。

拥有屏障环境动物实验室、普通环境动物实验室、分子生物学实验室、病理实验室。在大动物实验方面配备了大动物专门手术室、行为学分析系统、影像学相关仪器、脑立体定位注射系统、血液分析系统等用于动物模型构建和药效学、药代动力学分析的系统性设备。

仪器设备图片和名称：

大动物手术室

大动物操作间

荧光定量PCR

酶标仪

蛋白质跑胶和免疫印迹

低温离心机

大动物行为笼

脑立体定位系统

血液细胞分析流水线

全自动生化分析仪

全自动尿液分析仪

X光机

中心拥有强大的动物实验执行团队，硕士以上学历人员占比62%，本科以上学历人员占比90%，配备专业的兽医、动物饲养员、QA、手术团队、专题负责人岗位，对实验各个环节进行严格执行，层层质检，实验记录完善。

建立了完善的质量管理体系，涉及项目管理标准、质量管理标准、操作执行标准、产品标准、档案管理标准、实验室安全标准、实验动物伦理管理标准等，保障执行过程规范有序。

专注科研，引领健康！广西华仁济瀛生物科技有限公司，用科技赋能生命，为人类的健康事业贡献力量！

1. 脑卒中的概念

脑卒中又称中风，具有致残率高、复发率高和病死率高等特点；脑卒中可分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，出血性脑卒中和缺血性脑卒中，其中缺血性脑卒中约占85%，出血性脑卒中约占15%。缺血性脑卒中患者临床症状主要表现为：运动障碍、感觉功能及语言功能障碍，从而出现上下肢偏瘫、面瘫、言语不清等。

2．模型方法：大脑中动脉M1段缺血再灌注

临床上缺血性脑卒中患者主要是单侧大脑中动脉闭塞导致的。大多数患者在卒中后48小时内会得到溶栓治疗，再灌注会导致脑组织进一步损伤；大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）根据解剖结构可分为M1、M2、M3、M4，其供血区域越往后越小，因此采用开颅法短暂夹闭大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion，MCAO）建立缺血再灌注食蟹猴脑卒中模型拟临床缺血性脑卒中。

3. 模型构建流程和方法

4.成模标准

4.1行为学评分

术前、术后1、3、5、7天，根据《食蟹猴神经功能缺损评分表》（Hua zhu et al, 2011）进行行为学评分，见附录A。模型组动物的神经功能缺损评分应显著高于假手术组动物。

▲MCAO术后动物的行为学评分

（1）假手术组动物的神经功能缺损评分在术后1天时略高，随后逐渐恢复正常。（2）模型组动物在MCAO术后1~3天神经功能缺损评分逐渐升高，随后逐渐降低，在术后第3天神经功能缺损评分达到峰值；各个时间点与假手术组比较，均具有统计学差异。（3）依达拉奉干预组动物在MCAO术后1天神经功能缺损评分最高，随后逐渐下降；各个时间点与模型组比较具有统计学差异。

4.2 MRI扫描

在术前、MCAO术后3和7天进行MRI扫描，扫 描 序 列 有 T1WI、 T2WI、 T2W FLAIR、DWI，扫描结束后观察动物的苏醒情况，以及动物的精神行为状况。用 Weasis 软件进行图像分析，分别用T2W FLAIR和DWI序列分析水肿体积，每层水肿体积为该层水肿面积和层厚的乘积，各层的水肿体积之和为总的水肿体积。假手术动物应无水肿体信号，模型组动物的脑水肿体积应显著高于假手术组动物。

▲MRI扫描T2W FLAIR序列和DWI序列结果

（1）假手术组动物在术前无异常信号，术后1天有轻微水肿，3天时基本无异常信号。（2）模型组动物在术前无异常信号，术后3天和7天水肿体积与假手术组比显著升高。（3）依达拉奉组在术前无异常信号，术后3天和7天水肿体积与假手术组及模型组比较均具有显著差异。

4.3 TTC染色

在手术后的第8天，对动物实施安乐死，取下大脑，冠状方向切片，每片脑组织的厚度为4 mm，用2% TTC，固定后用扫描仪扫描组织片，ImageJ进行图片分析，测量梗死面积，每层梗死体积为该层梗死面积和层厚的乘积，各层的梗死体积之和为总的梗死体积。假手术组动物应无梗死体积，模型组动物梗死体积应显著高于假手术组动物。

▲脑组织梗死体积统计

（1）假手术组TTC染色呈现红色，无梗死体积。（2）模型组TTC染色正常组织呈现红色，梗死组织呈现白色，梗死体积显著大于假手术组。（3）模型组TTC染色正常组织呈现红色，梗死组织呈现白色，梗死体积与假手术组和模型组比较均具有显著差异。

1． 非酒精性脂肪肝病的概念

非酒精性脂肪肝病：Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD，是指除酒精和其他明确的肝损害因素所导致的，以肝细胞脂肪过度沉积为主要表现的一种疾病。临床表现为：（1）部分病人可有乏力、消化不良、肝区隐痛、肝脾肿大等症状；（2）体重超重和（或）内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂紊乱、高血压等代谢综合征相关症状。NAFLD患者病理呈现以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性，肝细胞气球样变为主要特征。

2．非酒精性脂肪肝病造模机制

高脂诱导的非酒精性脂肪肝病机制主要是由于过度摄入高脂肪饮食，导致肝脏中脂质的大量积累，脂质从头合成的过程中会产生大量的中间产物，如单酰甘油和二酰甘油等，引起肝细胞代谢紊乱、肝细胞线粒体功能障碍等。除此之外，高脂肪饮食同样会引起胰岛素抵抗，胰岛素抵抗可使外周脂解、肝摄取游离脂肪酸（FFA）增加，引起细胞β氧化产生过多ROS，造成肝细胞损伤，促进脂肪性肝炎的发生。

3. 模型构建流程

诱导非酒精性脂肪肝

自发性非酒精性脂肪

4.自发模型筛选标准

非酒精性脂肪肝患者特性主要表现为肥胖、中年年龄，通过这一特性挑选可能存在脂肪肝的动物，再进行B超检查来确认脂肪肝情况。动物筛选标准为：年龄≥8岁，体重≥8.0 kg，BMI≥40，B超提示为脂肪肝。

5.高脂饲料诱导成模标准

5.1生理指标

高脂饲料造模3个月，动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI升高，3个月后指标维持稳定。

▲高脂饲料饲养造模后动物生理指标变化注：“*”代表与0 mth比较，0.01<*P<0.05；**P<0.01。

（1）动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI在0到3个月升高。（2）动物体重、腹围、皮脂厚度、BMI在3到6个月趋于稳定。

5.2血生化指标

通过给高脂饲料造模，根据动物血生化指标分析评估非酒精性脂肪肝病模型，验证高脂饲料诱导构建NAFLD模型后，动物出现血脂、肝功能异常。

（1）高脂饲料喂养6个月后，NAFLD模型猴的总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、动脉粥样硬化指数（AI）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、胆碱酯酶（CHE）显著升高。（2）高脂饲料喂养6个月后，NAFLD模型猴的空腹血糖（FPG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷氨酰基转移酶（γ-GGT）有上升趋势。

5.3 B超指标

通过给高脂饲料造模，根据动物B超分析评估非酒精性脂肪肝病模型肝脏变化，验证高脂饲料诱导构建NAFLD模型后，动物肝脏存在脂肪肝情况。

（左图：造模前）高脂饲料诱导NAFLD模型猴的肝脏B超变化（右图：造模6个月）

高脂饲料喂养6个月后，NAFLD模型猴的肝叶偏大，肝实质回声增强，后方衰减，肝肾区回声反差存在，肝脏存在脂肪肝情况。

1.高血压的概念

高血压（hypertension，HBP）是指以体循环血液在流动时对血管壁造成的压力值（收缩压和/或舒张压）持续高于正常值的现象，伴有心、脑、肾等器官的功能或器质性损害的临床综合症。

2.项目流程

客户根据档案挑选自发高血压动物-血压持续监测-供试品注射-血压持续监测及采血。

血压值：测定时，动物静坐于猴椅上，身体、手臂、手指放松，手心向上、手臂自然弯曲，用电子血压计测量，将袖带卷绑在手臂上，袖带捆绑位置与心在同一水平面上，动物平静状态下测量6次以上，取3次（差值＜10）测量计算平均值，以 mmHg 记录，收缩压≥120 mmHg 和舒张压≥72 mmHg 判定为高血压。

手术造模：通过手术造成骨缺损。

（1）骨缺损的长度不能低于临界缺损长度(critical sizedefect)：指骨缺损后若不作任何处理无法自愈的最低骨缺损长度；

（2）动物负重管状骨的临界缺损长度应为其周径的 1. 5～2. 5倍；

（3）缺损局部临床表现结合X 线平片CT 扫描即可明确诊断。

1.消毒

2.定位

3.穿刺

4.取材