在构建点突变或基因敲入细胞的过程中,主要难点是模型所需的HDR修复效率太低,大部分基因型是由NHEJ修复方式造成的indel。其中一个主要原因是HDR修复的细胞周期依赖性:NHEJ几乎在任何细胞周期阶段都能发生,而HDR通常只有在S期和G2期——即DNA复制的阶段,才会进行。这就使得HDR的机会窗口比NHEJ小得多,限制了其效率。
EZ-HRex™全新升级
源井生物经过数年研发,在原CRISPR-U™基因编辑技术的基础上,创新性地添加U+分子,将该技术升级为EZ-HRex™
·有效调节细胞周期,促进转染后更多细胞进入S/G2期
·降低NHEJ途径活性,减少indel基因型占比,提高HDR效率
EZ-HRex™技术HDR效率展示
使用EZ-HRex™技术构建FOXP1基因点突变HEK293细胞,电转48h后收集Cell Pool,提取基因组DNA,经扩增后测序。通过EZ-editor™基因型分析系统对测序结果进行分析,结果显示该点突变Cell Pool的HDR效率是84%。
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客户成功案例分析
IF=20.8
肺癌——A549细胞MYC基因
该研究采用源井生物构建MYC (p.K148R)点突变A549细胞,MYC (p.K148Q)点突变的A549细胞,模拟乙酰化和非乙酰化的c-Myc状态,并研究这些改变对肿瘤细胞行为的影响。
IF=5
人乳头瘤甲状腺癌——TPC-1细胞TERT基因
DOI:https://doi.org/10.1210/clinem/dgae327
该研究采用了源井构建的点突变细胞,将TPC-1细胞中的TERT C228T突变转换回野生型。
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