犬和猫支气管肺泡灌洗

文摘   宠物   2023-02-26 14:07   江苏  
 肺部疾病在犬和猫上很常见。虽然一些患病动物接受了经验性治疗,并且恢复良好,但是很多患病动物需要做彻底的诊断,包括采集样本做细胞学分析,细菌培养和药敏测试,以及可能需要做PCR检测。
一  样本采集的方法

从呼吸道系统采集样本有几种方法,每种方法各有利弊。在人上面,诊断肺炎的标准操作是痰培养,但是这需要患者的合作。只有在极少的情况下可以看到动物的痰液,然后进行微生物培养。但是通常认为痰培养对诊断犬肺炎起到的作用很低。

在犬上,通过口腔拭子采集样本也做过评估,一项研究显示分离支气管败血伯氏杆菌的效果有限。虽然口腔拭子已经用于PCR检测,但是检测结果需要结合临床症状和实验室标准的仔细评估。

偶尔会对肺局灶性病变做细针抽吸,但是常常用于怀疑有肿瘤的病例,很少用于怀疑有感染性疾病(如:肺炎)。此外,虽然肺细针抽吸会有更高的诊断率,但是肺部细针抽吸可能与医源性气胸等并发症有关。

气管冲洗用于大多数怀疑有下呼吸道疾病的病例样本采集 ,其操作简单,成本低。气管冲洗采集到的样本可用于气管的细胞学评估以及细菌培养和药敏测试。临床医生通常会寻找细胞学上诊断依据,比如:炎症(中性粒细胞)、感染(变性中性粒细胞伴随细菌吞噬)、过敏(嗜酸性粒细胞)、寄生虫(幼虫)或者罕见的气管肿瘤。气管冲洗样本的细菌培养结果应结合细胞学做判断,因为较大的气道并非是无菌的,单纯的细菌阳性培养结果并不能区分气道定植菌和致病菌。

支气管肺泡灌洗液中存在的衬里细胞类型

气管和支气管
纤毛柱状上皮细胞、杯状细胞
细支气管
柱状到立方状上皮细胞、有纤毛到无纤毛
肺泡
I型肺泡细胞


健康犬猫支气管肺泡灌洗样本中非上皮细胞的占比


巨噬细胞
中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
淋巴细胞
肥大细胞

71%
5%
5%
17%
2%

70%
6%
18%
4%
1%

血涂片 —瑞士染色—放大100×   

图示退化白细胞伴随胞内细菌吞噬(白色箭头所示); 细胞外大量杆状菌(黑色箭头所示)


图A 猫过敏反应支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大250×
图示可见数个嗜酸性粒细胞,核呈双叶状和三叶状;弥散的肺泡巨噬细胞,两个核呈多分叶状的中性粒细胞;以及一个纤毛柱状上皮细胞
图B猫嗜酸性颗粒细胞—瑞士染色—放大250× 
在部分裂的细胞中更容易看到颗粒,背景中可见许多游离的嗜酸性粒细胞颗粒    

图A 犬过敏性反应支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大250×

图示大量染色明亮的嗜酸性粒细胞,以及染色不明显的细胞

图B 左侧图A的放大—瑞士染色—放大1000×

图示中央区的嗜中性粒细胞,胞浆呈淡色嗜酸性染色,细胞核多分叶。嗜酸性粒细胞具有明亮染色的嗜酸性颗粒,左侧为无分叶核,推测为球状白细胞,右侧为三叶核,典型的嗜酸性粒细胞   


图A 犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大132×
图示嗜酸性粘液背景下可见许多肺泡巨噬细胞和一些中性粒细胞
图B 犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大250×
黏液中可见大量受刺激和未受刺激的肺泡巨噬细胞,散在的粒细胞和淋巴细胞。


图A 犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大250×
图示杯状细胞(箭头)和数个纤毛柱状细胞。
图B 犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大330×
图示细胞外破裂杯状细胞颗粒(箭头),不能与细菌球菌混淆
图C 杯状细胞与肥大细胞(箭头)区别,肥大细胞颗粒更小。



图A 患弓形虫犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大250×
图示纤毛柱状细胞、红细胞、散在中性粒细胞和胞外弓形虫(箭头)
图B 犬支气管肺泡灌洗液—瑞士染色—放大330×
图示纤毛柱状细胞既可单独存在,也成簇存在。群集中细胞的形态无法辨别。弥散的细胞上有明显的纤毛。
图示许多细胞受到损伤,其不规则的核轮廓可证明

二、方案选择

支气管肺泡灌洗可通过经口腔(TransoralTtacheal =TOTW)和气管壁(Transtrachceal=TTW) 两种方法进行,方法的选择取决于临床医生的偏好和患病动物的特征。TOTW是在短暂麻醉,做气管插管的犬身上进行,而TTW是在患病动物清醒或者轻度镇静的情况下进行(避免麻醉风险),而且样本不会被口腔污染,所以是做微生物培养样本收集的首选方法,适量注入生理盐水,咳嗽反射也是收集样本回收的必要条件。操作方法就是插入一根导管穿过气管进入呼吸道。在这两种操作方法中,都会注入生理盐水以帮助回收气道分泌物。

根据作者的经验,TOTW更适用于小型犬(<10kg)、猫和短头犬,因为通常它们的气管直径较小,颈部较粗,这就使得气管的触诊定位更具有挑战性。虽然TTW在中、大型犬中更受欢迎,但是TOTW在大型犬中也可以进行操作。在非常大的犬中(比如:大丹犬),采用TTW,穿刺针导管的长度可能会限制样本的采集;然而,使用长导管的TOTW是首选方法。

TOTW的操作技术比较简单,对于不经常进行气管冲洗的临床医生是更优选择方法。TOTW的缺点包括患病动物需要短暂全身麻醉,以进行气管插管,麻醉后患病动物的咳嗽反射会降低甚至消失,这可能会影响样本的质量。TTW的潜在并发症包括:皮下气肿、气管撕裂或者出血。用生理盐水冲洗患病动物气管,其潜在的并发症包括:低氧血症、支气管痉挛,但是在病情稳定的动物身上是不存在的。

三、采样前、后准备
对患病动物做任何的处置,都应该评估其体况的稳定性。必须做好所有物料准备,并且需要一名助手。    
回收的液体应呈混浊状,偶有黏液斑点。样本采集后应立即进行院内细胞学检查(建议30分钟内,例如:中性粒细胞或者细胞内细菌)。理想情况下,样本应交给兽医临床病理学家进行判读,以及做微生物培养和药敏测试。患病动物在操作完成后,应进行仔细监护。


经口腔灌洗(盲插法)
Transoral Ttacheal =TOTW
一、操作前准备

无菌润滑剂;导管;麻醉药(通常是丙泊酚与低剂量阿片类药物或者和苯二氮卓类药物联合使用);供氧设备;监护仪(脉搏血氧仪、心电图);无菌气管插管(选择型号比平时小0.5~1号);无菌手套和喉镜;三等份无菌生理盐水;红色无菌橡胶导管;无菌采尿杯;EDTA管收集样本用于细胞学检查;细菌培养转运培养基。

二、操作流程

(一)进行短暂全身麻醉(一般静脉使用丙泊酚4~8mg/kg)。丙泊酚不仅可以快速恢复,而且对于喉功能的评估也有很大帮助。作者认为可以将阿片类或者苯二氮卓类药物加入到麻醉方案中。(动物麻醉后建议预吸氧)

(二)无菌操作气管插管。如果使用无菌润滑剂,要小心地在导管外壁少量涂抹。作者认为选择比正常所需型号稍小的气管插管更容易操作。(不建议涂抹润滑剂,有潜在干扰细胞学检查和微生物培养的可能。)

(三)将一根5~8F的红色橡胶导管沿气管内管向下缓慢插入(大型犬可选择使用16F聚氯乙烯胃导管;猫可选择5F聚丙烯导管),大约到气管隆突(心脏基部,约第四肋间)水平。注入生理盐水量:小型犬猫通常3mL;中型犬(10~20kg)是5mL;大型犬(>20kg)是10~15mL。(也有文章报道,注入量2ml/kg,准备等份剂量,直到回收需要的样本量,但是不建议超过三次注入)

(四)手动抽吸回收液体。如果使用抽吸装置,可以直接连到吸盘上。液体也可以直接收集,因为它是从气管内管排到无菌的尿液收集杯中。根据需要,也可额外抽吸液体。抬起患病动物后躯,或者旋转体位,可以促进液体的排出。回收的液体会有泡沫状,反映含有表面活性物质。



气管壁灌洗

(Transtrachceal=TTW) 

一、操作前准备

局部麻醉剂(利多卡因);剪刀;外科手术消毒液;穿针导管或者针联合聚丙烯或者红色橡胶导管;三等份无菌生理盐水。

二、操作流程

(一)将犬保定在处置台上,颈部适当伸展(过度伸展会增加口咽污染的机率),触诊环状软骨缘腹侧,会发现一个小的三角形凹陷,这就是环甲韧带和进针点,仔细触诊穿刺点的位置,少量注射1%~2%的利多卡因到皮下(结合轻度镇静更有利于操作),通过无菌操作在进针点皮肤上剪一小切口。大型犬也更容易识别环甲韧带。

(二)使用大规格商用静脉导管针套组,穿刺针呈向下斜角,缓慢进针,穿过皮肤、皮下组织和环甲韧带,进入气管腔内,一旦进入气管腔内,穿刺针将平行于气管。

(三)将导管穿过针进入气管腔并向下推进,直到位于隆突上方(心脏基部,约第四肋间),这时导管会很容易通过气管,如果没有,说明可能导管内嵌入气管壁背侧或者没有进入气管,这时需要拔除针和导管再重复进行操作,穿刺针插入和导管的通过会引起大多数动物咳嗽,将针从皮肤上取出,并固定好,以防止导管意外撕裂。

(四)通常在注入生理盐水之前,动物就开始咳嗽,这时就可以开始抽吸回收样本。注入温和生理盐水(5~10ml),然后抽吸回收样本,重复做三次(抽吸回收要在短时间内进行,长时间进行可能会收集到更多的样本,但是样本污染的概率也会加大,)。轻拍胸腔有助于刺激咳嗽,以提高样本质量。回收的液体只占注入其中的一部分(30%~80%),残留在气管支气管内的液体很快会被吸收,无需担心。操作完毕,拔出导管,轻压穿刺点几分钟或者用自粘绷带适度加压包扎(12~24小时),以防止皮下气肿的发生(发生概率极低)。



操作演示


气管壁灌洗

(Transtrachceal=TTW) 


经口腔灌洗(盲插法)
Transoral Ttacheal =TOTW

Liu V
所有生命都是一个整体,它的不幸就是你的不幸。