流式细胞术分析大量细胞样本:重启成年视网膜神经元再生

学术   科学   2024-07-09 07:30   北京  

本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括,若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏,敬请指正

2024年7月5日,Bio-protocol 期刊在线发表了美国西密歇根大学(Western Michigan University)Cindy L. Linn团队题为“Quantification of Proliferating and Mitotically Active Retinal Cells in Mice by Flow Cytometry”的方法文章。

https://doi.org/10.21769/BioProtoc.5024
关键词神经发生 流式细胞术 视网膜 PNU-282987 Alpha7 nAChR激动剂 Müller胶质细胞 视网膜神经节细胞 光感受器 增殖 有丝分裂

视网膜(Retina)为眼球壁的内层,分为视网膜盲部和视部。盲部包括视网膜虹膜部和视网膜睫状体部,各贴附于虹膜和睫状体内面,是虹膜和睫状体的组成部分。

成年哺乳动物通常无法再生视网膜神经元。然而,研究表明,通过局部应用选择性α7烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)激动剂PNU-282987,可以在有视网膜损伤的小鼠模型中促进视网膜神经元生成。PNU-282987被认为通过作用于视网膜色素上皮的α7 nAChRs,释放信号分子诱导穆勒胶质细胞重新进入细胞周期,去分化形成前体细胞,最终发育为成熟的视网膜神经元。先前的研究主要依赖荧光免疫标记和共聚焦显微镜,限制了多重标记抗体的数量。
为了克服这些限制,本文开发了一种流式细胞术方法,可以在解离的视网膜细胞中多重标记和分析多种外部和内部标记物。本文详细描述了该方法的步骤,展示了如何标记视网膜神经节细胞、杆状感光细胞和穆勒胶质细胞,以及在PNU-282987处理后产生的穆勒胶质细胞衍生的前体细胞。该方法为研究视网膜神经元再生机制提供了新的工具和视角。


  • 使用流式细胞术方法,能够在解离的视网膜细胞中同时标记和分析多种外部和内部标记物,提高了对细胞类型和状态的全面分析。

  • 流式细胞术相较于传统的荧光免疫标记和共聚焦显微镜,能够高通量地分析大量细胞样本,提高了研究效率和数据可靠性。

  • 能够同时标记和分析经过PNU-282987处理后产生的穆勒胶质细胞衍生的前体细胞,动态监测细胞的有丝分裂和增殖活动。

  • 视网膜损伤修复研究
    该方法可用于研究成年哺乳动物视网膜损伤后的再生机制,推动视网膜损伤修复疗法的发展。
  • 神经退行性疾病研究
    ‍适用于研究如视网膜色素变性和青光眼等神经退行性疾病,通过理解PNU-282987在神经元再生中的作用,寻找新的治疗途径。
  • 药物筛选与评估
    可用于筛选和评估其他潜在的神经再生药物,通过分析不同化合物对视网膜细胞的影响,加速新药开发进程。


这个方法的可重复性已经被本文作美国西密歇根大学(Western Michigan University)Cindy L. Linn团队验证过,相关实验数据与结果请见原文的“Validation of protocol”章节

温馨提示:积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定,也是确保实验可复现性的重要方式。

Vanzo-Sparks, H. K., Webster, S. E., Webster, M. K. and Linn, C. L. (2024). Quantification of Proliferating and Mitotically Active Retinal Cells in Mice by Flow Cytometry. Bio-protocol 14(13): e5024. DOI: 10.21769/BioProtoc.5024.

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