“四问”细胞空间表型研究难点
一问：每天都在做细胞免疫荧光试验，可以得到多少个可用于定量及定性的数据？
答：很有限
二问：一般基于常规显微镜观察细胞形态及表型分析？图像采集通量如何？
答：很慢，需要很扎实的显微镜功底，往往需要求助大师兄……
三问：图像分析一般用什么软件？需要花很大精力学习摸索么？
答：图像分析最头疼了，往往投入精力最大却效果一般~
四问：想不想……仅检测6个markers, 从而在每个细胞上可获取大于 1500个测量结果？？？
答：我可以吗？？？
神回复：你可以，它来了……
什么是Cell Painting？
Cell Painting应用背景
Cell Painting是由Anne Carpenter和Broad研究所的同事共同开发的，以提供一种基于图像的有效分析工具，极大加速了药物发现和多参数筛选研究的发展。正如Carpenter及其同事最初描述的那样，根据细胞的大小、形态、纹理和荧光强度等参数[1]的变化，得以从每个细胞中获取多达1500多个参数的实际测量值。这些测量值可用于反馈细胞表型的细微变化。Cell Painting作为一种有效的表型分析方法，其最突出的特点是其综合分析能力，可以从研究细胞骨架、质膜和细胞器水平等细胞生物学诸多参数中提取极为丰富的数据信息。
上图为通过CellInsight CX7 LZR Pro全新高内涵系统采集的U2OS细胞的Cell Painting图像。用Image-iT Cell Painting试剂盒进行标记：细胞核(通道1)；内质网(通道2)；核仁和细胞质RNA(通道3)；肌动蛋白、高尔基体和质膜(通道4)；线粒体(通道5)。得到的所有5个通道的红、绿、蓝(RGB)图像用伪彩显示。
Cell Painting 功能介绍
上图为心肌细胞Cell Painting的结果示例。该实验测量了细胞数量、核面积、心肌细胞体面积、线粒体膜电位、指示凋亡的细胞色素c释放、细胞核内p53的磷酸化导致的DNA损伤、检测活性氧(ROS)的二氢乙啶氧化以及导致脂肪变性的脂肪酸积累，并得到了细胞群体水平数据。所有化合物均在12个浓度点剂量反应曲线中筛选并进行3次重复。计算拟合曲线，并评估得出了最佳的IC50值。
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赛默飞生命科学
