RNA是一种很难处理的分子,很容易被环境中无处不在的RNase降解。RNase稳定性强,可以在反复冻融甚至高压灭菌后保留大量活性 ,并且对众多去污方法均具有抵抗作用。
接下来,就和小编一起看看,在RNA样本制备的过程中,如何避免RNase污染和保存RNA样本吧!
抑制内源性RNase
所有组织样品均含有内源性RNase。组织取样后若无法立即处理,常常需要用液氮迅速冷冻,尽可能地减少RNA的降解。然而,使用液氮中冷冻组织和后续处理的操作可能比较繁琐,尤其是对于大量需要保存的样品而言。
Invitrogen™ RNAlater™溶液是研究人员常用且信赖的组织储存和稳定液,可保护组织和细胞内的RNA。在RNA分离操作之前,您仅需将组织块简单地浸入相当于自身体积5-10倍的RNAlater溶液中,即可于4°C保存长达一个月。
Invitrogen™ RNAlater™溶液
让RNA时间静止的力量
实验台面、玻璃或金属器皿去RNase
请使用Invitrogen™ RNaseZap™试剂对实验台面、玻璃或金属器皿进行处理;如需处理大量器皿,也可对其进行烘烤,烘烤操作通常需要在232.2°C下进行2小时或更长时间(请勿放入胶带,会导致起火)。烘烤之前,请确保用铝箔纸包裹整个金属器皿、烧杯和烧瓶的顶部,以防止烘烤后受到污染。如果不想等待两小时,则建议使用RNaseZap试剂或湿巾。将已烘烤和经RNaseZap试剂处理过的物品标记为“无RNase”并存放在明确标示为无RNase的区域中,以防止污染。
Invitrogen™ RNaseZap™试剂
和两小时烘烤说再见
注:强烈建议需要RNase处理的程序在专用空间内进行,避免RNA样品不慎接触到RNase。
使用不含RNase的水
如果供水设备的来源及日常维护不佳,将使得分子生物学应用中使用的水和缓冲液成为RNase污染的常见来源。焦碳酸二乙酯(DEPC)处理是灭活水和缓冲液中RNase最常用的方法。然而含有伯胺基(例如Tris)和某些含仲胺或叔胺(例如HEPES)的试剂不能使用DEPC进行处理。胺基会与DEPC反应并将其“吸收”,使其无法用于灭活RNase。对于因不耐受高压灭菌而只能使用过滤除菌法的溶液,如MOPS,也就不适合用DEPC来处理,因为高压灭菌可有效灭活DEPC。
我们提供各种Invitrogen™缓冲液和水(经DEPC处理或未经处理),这些缓冲液和水经过严格的质量控制测试,确保不含RNase。
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赛默飞生命科学