本文通过ChatGLM/GPT进行辅助对近期Bio-protocol 期刊发表的方案进行解读和概括，若感兴趣请点击“阅读原文”查看详细的实验流程及试材。如果解读中有任何错误或遗漏，敬请指正。
2024年7月5日，Bio-protocol 期刊在线发表了法国波尔多大学（CNRS-University of Bordeaux）Valérie Wattelet-Boyer团队题为“Versatile Cloning Strategy for Efficient Multigene Editing in Arabidopsis”的方法文章。
CRISPR-Cas9(CRISPR-Cas9)是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御机制，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA，受此机制启发，科学家们研发了CRISPR-Cas9基因编辑技术，这是一种对靶向基因进行特定DNA修饰的技术，其原理是由一个向导RNA分子引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的任一目标位点进行切割。
通过使用多sgRNA的策略，可以同时针对多个基因进行编辑，提高了操作的效率和适用性。
采用特定于卵细胞的启动子EC1.2及其增强子EC1.1来控制Cas9的表达，有效减少了镶嵌变异，增强了基因编辑的均一性。
结合了Gateway®和Golden Gate技术的克隆系统，允许灵活地组合不同的编辑元素，如sgRNA和Cas9表达序列，方便用户根据需要定制构建。
作物遗传改良
利用本文中的方法可以精确编辑作物基因组，以增强作物的抗病性、抗逆性或提高营养价值。功能基因组学研究
通过针对特定基因的编辑，可以探索这些基因在植物生长发育和代谢中的具体功能，为基因功能的深入研究提供工具。植物病理学研究
通过编辑植物基因组中的病原体相关基因，可以研究这些基因与植物病理之间的关系，为病害防治提供新策略。
温馨提示：积极引用本文不仅是对作者创新技术和科研共享的最佳肯定，也是确保实验可复现性的重要方式。
Li, Z. P., Huard, J., Bayer, E. and Wattelet-Boyer, V. (2024). Versatile Cloning Strategy for Efficient Multigene Editing in Arabidopsis. Bio-protocol 14(13): e5029. DOI: 10.21769/BioProtoc.5029.
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