荧光免疫技术的方法学评价及临床应用
学术
2025-01-22 15:25
浙江
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荧光免疫技术主要包括荧光抗体技术、时间分辨荧光免疫测定、荧光偏振免疫测定和荧光酶免疫测定等，由于其检测方法学原理不同，在临床上的应用也有所不同，具体方法学评价如下。荧光抗体技术包括显微荧光抗体技术和流式荧光抗体技术。显微荧光抗体技术具有以下特点。一种免疫组化技术，具有特异性强、灵敏度高、操作简单、既可定性又可定位、直观性强、可同时检测两种以上的抗原(抗体)等特点。易出现非特异性背景染色，结果观察(荧光强度)带有主观性。
(1)灵敏度高，使得检测下限由普通荧光免疫技术的10-8 mol/L提高至10-18/L ~10-15mol/L，其灵敏度可与放射免疫分析技术相媲美。(3)标记物制备简单，标记结合物稳定，有效期长，测量速度快，无放射性污染。易受到实验耳境、试剂和容器中镧系元素离子河染的影响,易使本底增高。与其他非均相荧光免疫分析技术相比，荧光偏振免疫测定具有如下优点。(1)测定方法操作简便、快速，试剂盒专属性强，样品用量少，自动化程度高，适用于大批量样本的分析检测。(4)抗原与抗体之间的反应和样品分子的测定在溶液中进行，避免了圆相标记过程中反复多次的洗涤，减少了实验误差。(5)荧光偏振不受内滤作用的影响，对于有颜色和浑浊的标本仍能得到准确的结果。
(1)灵敏度高，较常规酶免疫技术提高了10~100倍。由于血清以及其他生物样本中可能存在背景荧光干扰反应，因此固相荧光酶免疫测定方法效果更好。
以上介绍的荧光免疫技术根据其原理不同，在检验医学中的应用也不尽相同。可根据各种检测方法的优势和特点来合理选择临床检验项目，以便提供精准的检测结果。各种检测技术的具体临床应用情况如下。
显微荧光抗体技术主要用于组织学中抗原或抗体的定位、自身免疫病的诊断，也可用于细菌、病毒和寄生虫的检验。这是显微荧光抗体技术在临床检验中的重要应用，主要使用间接免疫荧光法检测自身免疫病中的自身抗体。其特点如下：能够用简单的方法同时检测抗体和与抗体发生特异性反应的组织成分，并且能够在同一组织中同时检测抗不同组织成分的抗体。在细菌学检验中主要用于菌种的鉴定，是重要的补充手段。利用显微荧光抗体技术进行菌种鉴定比其他血清学检测方法更加简便快速，灵敏度更高。在病毒学检验中可检测病毒及其增殖情况，目前已有多种免疫荧光检测病毒试剂盒面世。在寄生虫感染的诊断中也具有重要地位，利用间接免疫荧光法检测疟疾抗体是目前公认的最有效的方法，对肠外阿米巴尤其是阿米巴肝脓肿也具有很高的诊断价值。常采用直接免疫荧光法，用于组织中免疫球蛋白、补体和抗原抗体复合物的检测，亦可用于肿瘤组织中肿瘤相关抗原，癌基因蛋白、微小转移灶等的检测；对于提高病理诊断的准确性，对肿瘤细胞增殖程度的评价，以及指导肿瘤治疗等都具有非常重要的价值。
流式荧光抗体技术可借助流式细胞仪对细胞表面抗原和受体进行检测，对细胞免疫功能检测白血病分型诊断等具有重要的诊断价值。
时间分辨荧光免疫测定技术(TRFIA)是目前超微量物质检测分析最有发展前途的一项新技术。目前TRFIA的自动化仪器和相应配套试剂在临床上已有广泛应用，TRFIA适用于体液中极微量生物活性物质的定量检测，如各种激素、蛋白质、酶、药物、肿瘤标志物和病毒等抗原的测定。
荧光偏振免疫测定技术(FPIA)尤其适用于血清或体液中小分子物质的测定，是临床药物浓度监测的首选方法。目前已有多种药物、维生素、激素、毒品和常规生化检测项目可使用FPIA进行定性和定量检测，如环孢素、卡马西平、苯妥英钠、丙戊酸、地高辛、氨茶碱、苯巴比妥等。
荧光酶免疫测定技术可用于多种抗原或抗体的检测，如病毒抗体、细菌及毒素抗原、肿瘤标志物、激素、过敏原、心肌损伤标志物以及凝血因子等。国家卫健委：必须开展的检验项目清单！
