前言：
马来西亚博特拉大学的研究中，将益生菌植物乳杆菌L20与马尾藻粉末相结合，创造出合生元，并将其添加到虾饲料中。该配方可提供协同效应，增强养殖虾的生长性能、免疫反应和对AHPN 疾病的抵抗力。
马尾藻（S. polycystum）
一、研究方法
1、从马来西亚霹雳州Teluk Senangin的孵化场随机挑选大小约10毫克的健康斑节对虾虾苗。600尾虾被带到马来西亚沙登马来西亚博特拉大学生物科学研究所的孵化场，在驯化过程中，200尾虾被随机分配到三个塑料罐（500L）中。
2、虾每天喂3次，对照饲料和体重的4%饲料，用过滤和紫外线处理海水，塑料罐配备了曝气装置，覆盖着黑色塑料布以遮挡光线，并配有加热器以将温度控制在约27°C。所有塑料罐均放置在孵化场的同一空间和区域，以保持相同的环境条件。
3、四种实验饲料，包括不添加益生菌和益生元的对照饲料，以及三种实验饲料，包括含有108CFU/g乳杆菌L20的益生菌饲料（PRO）、含有2%马尾藻粉的饲料（PRE）和含有108CFU/g乳杆菌L20和2%马尾藻粉末合成饲料（SYN）。在制备饲料之前，将基础饲料（Star Feedmill，Beranang，马来西亚；粗蛋白40％，粗脂肪5％，粗纤维3％，水分12％）研磨，并通过网筛。
4、驯化后，将600尾虾个体分为12个容量为100L的塑料池（90cm×60cm×30cm）（50虾/池×4组×3次重复）。这些组包括对照组（CON）、益生菌组（PRO）、益生元组（PRE）和合生元组（SYN）。所有塑料罐均放置在孵化场的同一空间和区域，以保持相同的环境条件。用实验饲料每天喂虾3次，持续35天，相当于体重的4%。在生长试验中，在试验开始时、7天后和35天后测量体重。第35天，记录测量结果，包括：最终虾的长度和重量以及未吃饲料的干重，以计算与生长相关的参数。
二、对虾增长的结果
与对照组相比，PRO组、PRE组和SYN组的最终体重和体重增加明显较高（表1）。与对照组相比，PRO和PRE组的特定生长率和蛋白质转化率较高，但SYN组的特定生长率和蛋白质转化率在各组中最高。PRO和PRE组的饲料转化率低于对照组，但SYN组的饲料转化率在各组中最低（表1）。所有组之间的生存率没有明显差异，另外，PRO、PRE、SYN和对照组的所有代表性虾均具有正常的肝胰腺颜色。
表1 实验中对虾生长性能参数
三、感染后虾的存活率结果
PRE组的存活率明显高于对照组，但PRO和SYN组的存活率在所有组中明显更高（图1）。
图1.感染后第3天（60小时），用6×10 5 CFU/mL副溶血性弧菌S2-4浸泡激发后，不同处理的虾的存活率。
四、斑节对虾的免疫基因表达结果
在试验中，脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白（LGBP）、过氧菌素、酚氧化酶原和溶菌酶明显上调，但与受体toll一样，crusin、青虾素和HSP70明显上调，与对照组相比，PRO和SYN组的表达下调。与对照组相比，LGBP、peroxinectin、Toll样受体和HSP70明显下调，cructin、penaeidin和溶菌酶没有明显差异。
在攻击试验中，对于虾头胸部，LGBP、peroxinectin和HSP70明显下调，壳没有明显差异，但Toll样受体和青虾素显着上调（p <0.05） ）来自PRO、PRE和SYN组与对照组的比较。与对照组相比，PRO组的酚氧化酶原和溶菌酶明显上调，但PRE组的明显下调。与对照组相比，SYN组酚氧化酶原表达明显上调（p<0.05），但溶菌酶表达明显下调。
在攻击试验中，PRO、PRE和SYN组与对照组相比。虾腹部的LGBP和壳没有明显差异，peroxinectin明显下调，但Toll样受体上调明显增加。与PRO和SYN组相比，酚氧化酶原明显上调，而青青素明显下调，但PRE组酚氧化酶原没有明显差异。
五、引起斑节对虾AHPND的副溶血性弧菌定量结果
pirA毒素基因的CT值通过参考标准曲线，显示引起AHPND的副溶血性弧菌的浓度，表明虾中存在存活的引起AHPND的副溶血性弧菌，包括菌株S2-4（图2）。无法确定引起AHPND的副溶血性弧菌浓度，因为在试验第35天，在用6×10 5浸泡60小时后的攻击中，在所有组虾的头胸部和腹部均未检测到pirA基因。
对照组与其他组相比，副溶血弧菌AHPND浓度分别为 6.410±0.291 Log10 CFU/mL 和 4.936±0.099 Log10 CFU/mL，在虾的头胸部和腹部分别明显最高。然而，最低浓度引起AHPND的副溶血弧菌在益生菌组和合生元组的虾中明显表达，分别为4.244±0.409 Log10 CFU/mL和4.504±0.203 Log10 CFU/mL。
图2.使用6×10 5 CFU /mL副溶血弧菌S2-4 浸泡的斑节对虾头胸部和腹部区域的特定 pirA 毒素基因，对引起AHPND的副溶血弧菌进行比较定量。
六、总结
总之，本研究表明，与益生菌和益生元相比，含有植物乳杆菌L20 和马尾藻的合生元强化饲料，可改善斑节对虾的生长性能、先天免疫反应并提高存活率。从概念上讲，合生元饲料补充剂可用于对抗水产养殖中的AHPND，并具有在生产中实际应用的潜力。
