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生物样品检测的前提是建立分析方法,而液质方法开发是一个十分考验个人技能的工作,如何将方法开发进行流程化,并将个人经验融其中,使方法开发变得流畅,是我们所要面对的问题,现在我们尝试解决这个问题。
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▉ 方法开发流程的拆解
液质分析方法开发一般分为四个部分,质谱分析方法,液相分析方法、前处理方法开发以及最后的方法确定。
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下面我们依次进行详细讲解
▉ 质谱方法开发
首先,质谱中检测到的所有物质都是以带电形式存在的,质谱检测到的数值为目标物的质荷比。质谱中的母离子大部分为目标物的分子离子峰(M)形式被检测到的,即
正模式(POS)下 ;负模式(NEG)。
以分子量为500的小分子为例,在正模式(POS)下小分子一般带1个电荷(即加合1个为氢离子带正点)
母离子;
在在负模式(NEG)下小分子一般会丢失一个1个电荷(即失去一个为氢离子带负电)
母离子。
然后,在确定母离子后,在合适的碰撞能量(CE)下,进行子离子的优化。
以AB质谱为例进行质谱分析方法开发的介绍。
1、在确定母离子后,首先进行母离子筛选。
1设置离子源参数;2选择Q1扫描模式;3选择离子源正负模式;4设置扫描范围,覆盖母离子以方便筛选;5打开注射泵灌注目标溶液;6选择母离子,可右键打开文件。如图1、2.
图1 参数设置局部放大界面。
2、子离子选择
1选择扫描模式为子离子扫描;2设置子离子扫描范围;3、4设置碰撞能量,进行母离子碎裂;5选择子离子,可右键打开文件即为6,在此进行子离子选择。如图3、4、5.
图3 参数设置局部放大界面。
图4参数设置界面。
图5子离子选择界面。
3、碰撞能量(CE)的优化
1选择扫描模式为MRM;2将选择的母离子及子离子分别填入;3、4设置碰撞能量,进行碰撞能量的优化;5选择子离子,可右键打开文件即为6,在此进行CE选择。如图6、7、8.
图6 参数设置局部放大界面。
图7参数设置界面。
图8 碰撞能量选择界面。
4、去簇电压(DP)的优化
1选择扫描模式为MRM;2将选择的母离子、子离子及CE分别填入;3、4设置去簇电压,进行去簇电压的优化;5可右键打开文件即为6,在此进行DP选择。如图9、10、11.
图9 参数设置局部放大界面。
图10 参数设置界面。
图11 去簇电压选择界面。
▉ 总结
不同厂家仪器参数优化方式不同,但所需优化的参数及优化逻辑大致相同,依次方式即可完成质谱方法的优化。
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