液质方法开发||01:质谱条件优化

学术   科学   2024-12-24 14:58   湖南  

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生物样品检测的前提是建立分析方法,而液质方法开发是一个十分考验个人技能的工作,如何将方法开发进行流程化,并将个人经验融其中,使方法开发变得流畅,是我们所要面对的问题,现在我们尝试解决这个问题。
---Laughing

方法开发流程的拆解  

 

液质分析方法开发一般分为四个部分,质谱分析方法,液相分析方法、前处理方法开发以及最后的方法确定。

1.质谱方法的建立:具体根据目标物响应配制目标物(浓度一般在100ng/mL)灌注质谱,确定离子化的正负模式,选择母离子(Q1),筛选子离子(MS2),优化DP,CE(MRM)建立质谱方法;
液质分析方法开发【基础篇】——质谱条件优化

2.液相方法建立:质谱方法建立后,一般选择纯溶液进行液相方法开发(此时需要的样品浓度较低,一般低于10ng/mL),确定流动相(甲醇,乙腈,可挥发性盐的加入),选择色谱柱,考察柱温等参数;
液质分析方法开发【基础篇】——液相条件优化(上)
液质分析方法开发【基础篇】——液相条件优化(下)

3.前处理方法优化:液质方法建立后,然后用样品加标形式进行前处理方法的优化。常用的前处理方法包括蛋白沉淀(PPT)、液液萃取(LLE)、固相萃取(SPE)、衍生化等。
液质分析方法开发【基础篇】——前处理条件优化

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下面我们依次进行详细讲解

▉ 质谱方法开发 

 

       

 

首先,质谱中检测到的所有物质都是以带电形式存在的,质谱检测到的数值为目标物的质荷比。质谱中的母离子大部分为目标物的分子离子峰(M)形式被检测到的,即

正模式(POS)下 ;负模式(NEG)

以分子量为500的小分子为例,在正模式(POS)下小分子一般带1个电荷(即加合1个为氢离子带正点)

母离子

在在负模式(NEG)下小分子一般会丢失一个1个电荷(即失去一个为氢离子带负电)

母离子 

 

然后,在确定母离子后,在合适的碰撞能量(CE)下,进行子离子的优化。

以AB质谱为例进行质谱分析方法开发的介绍。

1、在确定母离子后,首先进行母离子筛选。

1设置离子源参数;2选择Q1扫描模式;3选择离子源正负模式;4设置扫描范围,覆盖母离子以方便筛选;5打开注射泵灌注目标溶液;6选择母离子,可右键打开文件。如图1、2.

图1 参数设置局部放大界面。

2、子离子选择

1选择扫描模式为子离子扫描;2设置子离子扫描范围;3、4设置碰撞能量,进行母离子碎裂;5选择子离子,可右键打开文件即为6,在此进行子离子选择。如图3、4、5.    

图3 参数设置局部放大界面。

图4参数设置界面。   

图5子离子选择界面。

3、碰撞能量(CE)的优化

1选择扫描模式为MRM;2将选择的母离子及子离子分别填入;3、4设置碰撞能量,进行碰撞能量的优化;5选择子离子,可右键打开文件即为6,在此进行CE选择。如图6、7、8.

图6 参数设置局部放大界面。   

图7参数设置界面。

图8 碰撞能量选择界面。

4、去簇电压(DP)的优化

1选择扫描模式为MRM;2将选择的母离子、子离子及CE分别填入;3、4设置去簇电压,进行去簇电压的优化;5可右键打开文件即为6,在此进行DP选择。如图9、10、11.    

图9 参数设置局部放大界面。    

 

图10 参数设置界面。   

 

   

图11 去簇电压选择界面。

▉ 总结 

 

       

 

不同厂家仪器参数优化方式不同,但所需优化的参数及优化逻辑大致相同,依次方式即可完成质谱方法的优化。   


液质分析方法开发【基础篇】——质谱条件优化

液质方法开发全流程

LC-MS/MS 液质方法开发和验证

方法开发手册|1.0|—液质工作原理

玩转质谱|1|:什么是质谱

玩转质谱|3|:液质(LCMS)中化合物常用的几种扫描模式

玩转质谱|4|:液质(LCMS)中常见的子离子

玩转质谱|27|:质谱关键参数解答

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