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高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术鉴于HPLC在全行业运用越来越广泛,因此每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC,对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余,才能在运行故障的时候即使解决问题,提高工作效率。
操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象,并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A、没有压力显示,没有流动相流动
B、流动相流动正常,但没有压力显示
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过分拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。
A、接头处漏液
D、色谱柱漏液
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾
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| 4、调整PH值。对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰 |
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| 1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。 |
| 2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。 |
E、早出的峰变形
G、K’增加时,脱尾更严重
K、保留时间不断变化
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1、柱温波动。(即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。) | 1、控制好柱子和流动相的温度,在检测器之前使用热交换器。 |
2、流动相不均匀。(流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。) | 2、使用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气,使用中使用氦气。 |
| 3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用盐酸) |
4、检测器出口阻塞。(高压造成流通池窗口破裂,产生噪音基线) | 4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。 |
| 5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。 |
| 6、用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 |
| 7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。 |
8、样品中有强保留的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而表现出一个逐步升高的基线。 | 8、使用保护柱,如有必要,在进样之间或在分析过程中,定期用强溶剂冲洗柱子。 |
| 9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时,使用新的流动相。 |
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| 1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。 |
| 2、见第三部分。检查管路接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换泵密封。 |
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| 5、断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正。 |
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| 1、见第三部分。检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封。检查流通池是否漏液。 |
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7、流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音。) | |
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| 10、维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,建议不使用泵的混合装置 |
O、宽峰
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| 3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。 |
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| a、小体积进样(例如:10ul而不是100ul)以1:10或1:100的比例稀释样品 |
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| 8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰,则用强溶剂冲洗旧柱子。 |
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P、分离度降低
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| 2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞,可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,进口可能阻塞了,更换入口处的筛板或更换色谱柱。 |
Q、所有的峰面积都太小
A、手动进样阀,转动不灵
C、自动进样阀,不能转动
由气味、景象和声音可以发现的问题,你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯,每天花上几分钟运用你的感官(除了味觉)来“感觉”你的液相色谱是否存在问题,这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如:在你看到漏液之前,你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。
A、溶剂的气味
B、热气味
C、读数不正常
E、警告音
下表中列出了液相色谱常见的一些问题,右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。
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| 2、a、避免使用PH>8的流动相(针对大部分硅胶的柱子) |
来源|Analyse学堂
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