金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
仪器和设备
显微镜
恒温培养箱：36℃±1℃
离心机
灭菌刻度吸管：10mL、1mL
试管：18 mmx150mm
载玻片
酒精灯
三角瓶：250mL
高压灭菌器
恒温水浴箱
培养基和试剂
1. SCDLP液体培养基
成分：
酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
卵磷脂 1g
吐温 80 7g
蒸馏水 1000mL
制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其他成分混合，加热溶解，调pH为 7.2-7.3 分装，每瓶 90mL，121℃高压灭菌20min。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注:如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
2. 营养肉汤
成分：
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
蒸馏水加至 1000mI
制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃高压灭菌15min。
3. 7.5%的氯化钠肉汤
成分：
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 75g
蒸馏水加至 1000ml
制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃高压灭菌15min。
4. Baird Parker 平板
成分：
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母浸膏 1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂 5g
琼脂 20g
蒸馏水 950ml
pH7.0±0.2
增菌剂的配制：30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10m混合，保存于冰箱内。
制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃±1℃校正pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，每95mL加入预热至50℃左右的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过 48h±2h。
5.血琼脂培养基
成分：
营养琼脂 100mL
脱纤维羊血(或兔血) 10mL
制法：将营养琼脂加热融化，待冷至50℃左右无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
6.甘露醇发酵培养基
成分：
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
甘露醇 10g
牛肉膏 5g
0.2%麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
制法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，68.95kPa(115℃ 10Ib)20min灭菌备用。
7. 灭菌液体石蜡
制法：取液体石蜡50mL，121℃高压灭菌20min。
8. 兔(人)血浆制备
取 3.8%柠檬酸钠溶液，121℃高压灭菌30min，1份加免(人)全血4份，混匀静置；2000rpm-3000rpm离心3min-5min。血球下沉，取上面血浆。
操作步骤
1.增菌：取 1:10稀释的样品10mL接种到90mL SCDLP 液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养 24h±2h。
注:如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤。
2.分离：自上述增菌培养液中，取1-2接种环，划线接种在Baird Parker 平板培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置36℃+1℃培养48h。在血琼脂平板上落呈金黄色，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker 平板培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h±2h。
3.染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5μm-1μm。
4. 甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入高度为 2mm-3mm 的灭菌液体石蜡，置36℃±1℃培养 24h±2h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。
5. 血浆凝固酶试验：吸取1:4新鲜血浆0.5m，置于灭菌小试管中，加入待检菌24h+2h肉汤培养物0.5mL。混匀，置36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入无菌1:4血浆0.5mL，混匀，作为对照。
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