定义与检测标准
铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在42℃±1℃条件下能生长。
检测依据标准：《化妆品安全技术规范》国家药品监督管理局（2015版）第五章 微生物检验方法4 铜绿假单胞菌检验方法
仪器
恒温培养箱：36℃+1℃、42℃+1℃3.1
三角瓶，250mL
试管：18 mmx150mm
灭菌平皿：直径 90mm
灭菌刻度吸管，10mL、1mL
显微镜
载玻片
接种针、接种环
电磁炉
高压灭菌器
恒温水浴箱
培养基和试剂
1.SCDLP液体培养基
成分：
酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
卵磷脂 1g
吐温80 7g
2.十六烷基三甲基溴化铵培养基
成分：
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
十六烷基三甲基溴化铵 0.3g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
制法:除琼脂外，将上述成分混合加热溶解，调pH为7.4-7.6，加入琼脂，115℃高压灭菌 20min后，制成平板备用。
3.乙酰胺培养基
成分：
乙酰胺 10g
氯化钠5.0g
无水磷酸氢二钾1.39g
无水磷酸二氢钾0.73g
硫酸镁MgSO4 0.5g
酚红 0.012g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
除琼脂和酚红外，将其他成分加到蒸馏水中，加热溶解，调pH为7.2，加入琼脂、酚红，121℃高压灭菌 20min 后，制成平板备用。
4.绿脓菌素测定用培养基
成分：
蛋白胨 20g
氯化镁 1.4g
硫酸钾 10g
琼脂 18g
甘油(化学纯) 10g
蒸馏水 1000mL
制法:将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使其溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装于试管内，115℃高压灭菌20min后，制成斜面备用。
5. 明胶培养基
成分：
牛肉膏 3g
蛋白胨 5g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
制法:取各成分加到蒸馏水中浸泡20min，随时搅拌加温使之溶解，调pH至7.4，分装于试管内，经115℃高灭菌20min后，直立制成高层备用。
6.硝酸盐蛋白胨水培养基
成分：
蛋白胨 10g
酵母浸膏 3g
硝酸钾 2g
亚硝酸钠 0.5g
蒸馏水 1000ml
制法:将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加热使之溶解，调H为7.2，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，115℃高压灭菌 20min 后备用。
7.普通琼脂斜面培养基
成分：
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000ml
操作步骤
1.增菌培养：取1:10样品稀释液10mL加到90mLSCDLP 液体培养基中，置36℃±1℃培养18h-24h。如有铜绿假单胞菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
2.分离培养：从培养液的薄膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置36℃+1℃培养18h-24h。凡铜绿假单胞菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平板上，置36℃+1℃培养 24h+2h，铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基呈红色，其他菌不生长。
3.染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。
4.氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片置于灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取铜绿假单胞菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，在15s-30s之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，为氧化酶试验阴性。
5.绿脓菌素试验：取可疑菌落2个-3个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，置36℃±1℃培养 24h+2h，加入氯仿 3m-5mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1mol的盐酸1mL左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。
6.硝酸盐还原产气试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在硝酸盐水培养基中，置 36℃±1℃培养24h+2h，观察结果。凡在硝酸盐水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。
7.明胶液化试验：取铜绿假单胞菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置36℃+1℃培养 24h+2h，取出放置于4℃+2℃冰箱10min-30min，如仍呈溶解状或表面溶解时即为明胶液化试验阳性;如凝固不溶者为阴性。
8.42℃生长试验：挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，置于 42℃±1℃培养箱中，培养24h-48h，铜绿假单胞菌能生长，为阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。
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