在前面的2025版中国药典主要变化解析系列之三：1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中提到了，2025版中国药典的修订关于每批培养基都需要做适用性，这将导致在日常检测过程中遇到微生物限度检测用培养基适用性问题的频率会越来越高，本期将对这一变化做出解答和补充。
下面总结了几点关于培养基适用性试验时会经常遇到的问题，以及如何解决它们。
问题 1
自制培养基平皿表面水珠凝聚，造成涂布培养后菌落蔓延无法计数。
原因分析：主要是培养基浇碟子时，培养基温度过高造成的。
▶ 推荐的培养基制备流程：
1、上午11点开始用干粉培养基天平称重，11点20开始灭菌，13:00结束后立即开锅，在灭菌锅中冷却至13:30（灭菌锅虚掩）。
2、将自制培养基和对照培养基置于50℃水浴锅中待用。
（知识点：灭菌锅灭菌结束时，需要及时开锅，避免培养基长时间在灭菌锅中缺氧，造成培养基品质下降，培养基适用性失败且影响实验结果。）
▶ 培养基浇碟：
1、50℃水浴锅取出后，一般5分钟之内将培养基浇置空平皿中。平皿冷却后，观察培养基表面有无水珠，若无水珠则可直接进行涂布操作。多余的培养基可以放置在生物安全柜中或置密封袋（不是呼吸袋）里2-8℃保存。
2、需要当天使用则打开平皿盖，轻轻甩掉表面的水珠，在运行的生物安全柜中放置0.5-1h直到表面没有水珠，然后进行涂布计数。
3、若不需要当天使用：
（1）直接放置在生物安全柜中，盖上平皿，生物安全柜关机，7天内使用。
（2）装入自封袋中保存在2-8℃冰箱中，2周内使用。使用前，提前一天取出，使平皿中水珠自动蒸发消失。
图1 常见培养基灭菌制备流程图
问题 2
培养后计数结果超标
原因分析：培养后没有每天上下午观察计数，没有掌握计数规则。
图2 定量菌株推荐使用流程图
▶ 知识点：黑曲霉和白色念珠菌容易在底部聚集，使用前一定再要涡旋10s。
问题 3
培养后无法计数或计数结果统计错误
原因分析：培养后没有每天上下午观察计数，没有掌握计数规则。
表1 培养基适用性的常见菌株生长特点
▶ 计数结果判定：
举例：
▶ 定量菌株随着保存时间的增加，数量在逐渐减少。可以采用增加吸取体积的方法。
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