【文献读图】文献里的流式细胞图怎么看?1分钟详解(附28种数据图解读PDF)

文摘   2024-12-12 18:30   浙江  

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导读
1.流式细胞图的定义&用途
2.流式细胞图怎么看?
2.1 流式图1 - 细胞周期分析

2.2 流式图2 - 细胞表型分析



01
流式细胞图的定义&用途
定义
流式细胞图是通过流式细胞仪自动分析分选细胞后,将生物物理、生物化学特征参量以图形化展示出来的一种工具。其包括直方图、散点图、等高线图等图表类型,能直观反映细胞特性、分布及数量等信息。

用途
  • 细胞周期分析:可以用来检测细胞DNA的含量,从而判断细胞所处的周期阶段(G0/G1、S、G2/M期);可以展示不同周期阶段细胞的分布和比例,有助于研究细胞增殖和分裂的调控机制。

  • 细胞表型分析:通过检测细胞表面的特定抗原或受体,可以区分不同类型的细胞(如T细胞、B细胞等);还能分析不同细胞亚群的分布和比例,有助于研究细胞的分化和功能。

  • 细胞凋亡分析:可以检测细胞凋亡过程中产生的特定生物标志物,如磷脂酰丝氨酸的外翻、DNA的片段化等;还可以直观地展示凋亡细胞的数量、比例以及凋亡进程的不同阶段。

  • 细胞因子检测:可以检测细胞内/外分泌的细胞因子,如白细胞介素、干扰素等;有助于研究细胞因子在免疫调节、炎症反应等过程中的机制。


02
流式细胞图怎么看?

流式图1 - 细胞周期分析



元素解读
图A、B(以图A为例)
横坐标为DNA含量,括号里的词组缩写为PI-A,PI是碘化丙啶(一种与DNA相结合的荧光染料);A代表荧光信号的面积,即横坐标指代DNA含量
纵坐标为检测到的细胞数量
③从左到右的3个峰分别对应G0G1、S、G2/M阶段
图例:细胞在3个不同细胞周期所占的比例,例:在图A中,处于G0G1期的细胞占总体的52.10%

图C
纵坐标为不同细胞周期分布的细胞百分比
横坐标为3个细胞周期
图例:实验组为采用低浓度JXS水提液31.25µg·mL-1刺激细胞

结果解读
流式细胞术检测结果发现,低浓度JXS水提液31.25 µg·mL-1刺激ECA-109细胞24 h后,G0/G1 期细胞数量大幅度减少(P<0.01),S期细胞基本不变,G2/M期细胞显著增加(P<0.01),证明JXS水提液将ECA-109细胞周期阻滞在G2/M期。

//////

流式图2 - 细胞表型分析



元素解读
  • 荧光标签:GFP(绿色荧光蛋白)、mCherry(红色荧光蛋白)
  • FSC即前向角散射光,能体现细胞的相对大小(不能具体到多少微米)
  • SSC即侧向角散射光,能体现细胞的颗粒度(细胞的复杂程度:细胞器的多少、细胞表面的凹凸程度等)
  • 针对小鼠抗原的抗体:Ly6G-APC、CD11b-BV711、F4/80-PE-Cy7、SiglecF-PE


对照组结果(图a):从未注射药物的小鼠模型中提取骨髓来源的细胞,通过流式细胞术检测确定是否为白血病细胞(a①),再进行白血病细胞的表型分析(a②~④)
  • 图a①:未经Dox作用的白血病细胞能检测到GFP、mCherry荧光,且白血病细胞占样品总量的38%

  • 图a②:FSC为中间值,表示检测到的细胞大小为中等水平;SSC值偏小,表示细胞颗粒度较小(细胞表面较光滑、细胞器偏少等)

  • 图a③:检测到的荧光主要位于左下角(即CD11b-,Ly6G-),双阴性;左上角的“1”表示在该区域检测到的细胞量占总量的1%

  • 图a④:检测到的荧光主要位于左下角(即F4/80-,SiglecF-);左下角的“99”表示在该区域检测到的细胞量占总量的99%

  • 图a⑤:检测到的未分化的白血病细胞电子显微镜图像


实验组结果(图b):给小鼠模型注射Dox,8天后从体内提取骨髓来源的细胞,通过流式细胞术检测确定是否为白血病细胞(b①),再进行白血病细胞的表型分析(b②~⑧)
  • 图b①:经Dox作用的白血病细胞能检测到低GFP、高mCherry荧光,且白血病细胞占样品总量的55%

  • 图b②:通过FSC、SSC指标可发现,经Dox诱导的白血病细胞分化成两种细胞类型,SSCHIGH的细胞量占比18%,SSCLOW的占比82%

  • 图b②~⑤:SSCHIGH组的细胞再经过4种抗体荧光指标检测,显示为(F4/80+、SiglecF+)双阳性,即为嗜酸性粒细胞

  • 图b②&⑥~⑧:SSCLOW组的细胞同理检测后,显示为(CD11b+,Ly6G+)双阳性,即为中性粒细胞


结果解读
对照组与实验组进行比较,得出实验组再注射Dox后的8天左右,白血病细胞GFP的表达受到抑制,且Dox诱导的分化导致两种白血病衍生的成熟骨髓谱系亚群出现,即中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(当然,后续也结合了其他实验来证明)。

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