工作校准品,怎么样避免基质效应,造成的对比偏差

文摘   2024-12-13 11:30   广东  
分享自己认识范围内的经验与技巧。我们知道,工作校准品在确保检测准确性方面发挥着关键作用,但基质效应可能会导致样本对比测试出现偏差,从而影响检测结果的可靠性。如何避免基质效应带来的这种偏差是提高检测质量的重要环节。

1、基质效应概念及影响

(1)基质效应的定义 :基质效应(matrix effect)按照NCCLS文件的定义,指的是标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响,以及基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰  。广义来说,基质效应也应包括已知的干扰物如胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等干扰物,但目前更多将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素(如粘度、pH等)的影响。基质效应所致分析结果的偏差称为基质偏差(matrix bias)。

(2)对样本对比测试的影响:在使用赋值的工作校准品时,如果存在基质效应,可能会使校准品的赋值不能准确反映实际样本中的情况。例如,在生化检测中,血清样本的基质成分复杂,当校准品的基质与实际样本基质存在差异时,可能导致检测结果出现偏差。这种偏差在样本对比测试中表现为,本应相似或相同的样本,由于基质效应的干扰,检测出的数值可能有较大差异,影响对样本性质和状态的准确判断。

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2、赋值工作校准品的重要性及易受基质效应影响的原因

(1)赋值工作校准品的重要性:

工作校准品是校准检测系统的重要物质,其赋值的准确性直接关系到检测结果的准确性。通过准确赋值的工作校准品,可以建立检测仪器的标准曲线,将未知样本的检测信号转换为可测量的分析物浓度,从而为临床诊断提供可靠的数据支持。

(2)易受基质效应影响的原因: 工作校准品的基质可能与实际临床样本的基质不完全相同。例如,工作校准品可能是经过处理的混合血清,在处理过程中血清基质的理化性质可能发生改变,而实际临床样本则具有更多的个体差异和复杂的基质成分。这种来源上的差异使得工作校准品在使用过程中容易受到基质效应的影响。

(3)分析系统的特异性: 不同的分析系统(包括方法、试剂及所用仪器设备)对基质效应的敏感度不同。即使是经过赋值的工作校准品,当它应用于特定的分析系统时,如果该分析系统与校准品的基质不匹配,就容易出现基质偏差。例如,某些免疫化学分析方法对样本中的蛋白质基质成分非常敏感,若工作校准品中的蛋白质基质与实际样本差异较大,就可能导致分析结果的偏差。

3、避免基质效应造成样本对比测试偏差的方法

(1)校准品的选择:选择与样本基质相似的校准品 ,尽量选择基质与实际临床样本相似的工作校准品。例如,对于血清样本检测,优先选择血清基质的校准品。如果可能的话,可以选择来自多个个体混合的血清校准品,以更好地模拟临床样本的多样性。这样可以减少由于基质差异导致的偏差。 在使用工作校准品之前,需要对其基质效应进行评估。可以采用多种方法进行评估,如比较校准品与新鲜(或冰冻)血清的测定结果。因为通常认为测定新鲜(或冰冻)血清无基质效应,如果校准品与新鲜血清的测定结果差异较大,则可能存在基质效应。同时,也可以参考其他实验室的使用经验或者相关的研究报告来评估校准品的基质效应。 

(2)样本处理的优化: 在样本采集、处理和储存过程中,要尽量减少对样本基质的改变。例如,在血清样本采集时,要按照标准操作规程进行操作,避免溶血、脂血等情况的发生,因为溶血会释放红细胞内的成分进入血清,改变血清的基质成分;脂血会增加血清的脂质含量,影响检测结果。在样本储存方面,要选择合适的温度和储存条件,防止样本变质和基质成分的变化。对于一些容易受基质效应影响的样本,可以进行适当的预处理。例如,对于含有高浓度胆红素的样本,可以采用一些特殊的处理方法去除胆红素的干扰,从而减少基质效应。但在进行样本预处理时,要确保处理方法不会引入新的干扰物质或改变分析物的性质。

(3)分析系统的优化:选择合适的分析方法对于减少基质效应至关重要。不同的分析方法对基质效应的敏感性不同,例如,一些先进的液相色谱 - 质谱联用(LC - MS/MS)技术对基质效应的抵抗能力相对较强。在选择分析方法后,要进行充分的方法验证,包括对基质效应的评估。验证过程中可以使用不同基质的样本进行测试,观察分析方法的准确性和稳定性。确保所使用的试剂和仪器相互匹配。试剂的成分和性能可能会影响对基质效应的抵抗能力,而仪器的检测原理和参数设置也与基质效应有关。例如,某些试剂可能与特定仪器结合使用时能够更好地处理基质复杂的样本,减少基质偏差。定期对仪器进行校准和维护,保证仪器的性能稳定,也是减少基质效应的重要措施。

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