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说到能为人类作出贡献的发明创造，中医中药应该算一个，而其中的经方更是我们引以为自豪的。今天馆长为大家分享一篇中药经方发文套路：网络药理学+实验验证—干湿结合类文章，下面咋们一起看下这篇文章的套路如何运用到你自己的课题思路？看看换换疾病？换换经方？你是否也能“即刻”将一篇SCI收入囊中？
文章由清华大学团队在Journal of Ethnopharmacology上发表，研究运用网络药理学分析筛选药物靶点和通路，妥妥滴用现代医学方法阐明中医的潜在机制；利用分子对接和分子力分析进行验证，可靠性不在话下；通过建立Aβ诱导的SH-SY5Y细胞模型和动物实验，在细胞和整体水平上进一步验证了GHYSJ的神经保护作用，为GHYSJ的临床应用提供了科学依据。（网络药理学无从下手？分子对接一筹莫展？还在为这些问题而犯愁就速速联系馆长吧~馆长风里雨里时刻为您排忧解难！）
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关键词：阿尔茨海默病；淀粉样蛋白聚集途径；BACE1；古汉养生精；网络药理学
一句话总结这篇文章：这篇文章通过网络药理学和分子对接技术，探讨了古汉养生精（Guhan Yangshengjing，GHYSJ）对阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）的保护机制，揭示了GHYSJ通过调节β-淀粉样前体蛋白（APP）的β位点裂解酶1（BACE1）来减少Aβ积累，从而可能延缓AD的进展。
研究背景
阿尔茨海默病（AD）是一种常见的神经退行性疾病，其特征是认知功能逐渐下降，目前缺乏有效的治疗手段。古汉养生精（Guhan Yangshengjing，GHYSJ）是一种基于古代中医经典文献的中药复方，被认为可能对AD有保护作用，但其具体作用机制尚不清楚。网络药理学和分子对接技术的应用为揭示GHYSJ如何通过多种活性成分和靶点影响AD病理过程提供了新的研究手段。
研究思路
研究方法
l网络药理学分析：通过构建化学成分-靶点-通路网络，预测GHYSJ治疗AD的潜在靶点和信号通路；
l分子对接：使用分子对接技术验证活性成分与靶点之间的相互作用关系，并评估它们之间的结合亲和力；
l液相色谱-质谱联用（LC-MS）：分析GHYSJ的化学成分，鉴定能够穿过血脑屏障的生物活性化合物；
l高效液相色谱（HPLC）：对GHYSJ中的主要成分进行定量分析；
l细胞实验：建立Aβ诱导的SH-SY5Y细胞模型，验证网络药理学和分子对接结果，检测GHYSJ对细胞活力（CCK-8实验）、细胞凋亡（流式细胞术）和BACE1表达（免疫荧光技术）的影响；
l组织病理学检查（H&E染色）：评估GHYSJ对大鼠组织（海马体、心脏、肝脏、脾脏、肺和肾脏）的影响，以评估其安全性。
主要结果
1.GHYSJ治疗AD的网络药理学分析
基于TCMSP数据库，鉴定了155种具有穿透血脑屏障并进入大脑能力的活性成分，从Genecards数据库获得了1390个与AD特别相关的潜在靶点。GHYSJ靶点（970个基因）和AD相关靶点（1390个基因）取交集得到293个交集基因，PPI网络进一步分析确定了44个核心靶点，其中包括淀粉样蛋白前体（APP），因此预测GHYSJ对AD的作用机制可能与APP或其上下游靶点有关。
(A)GHYSJ具有穿透血脑屏障进入大脑能力的一部分；
(B)GHYSJ和AD中靶基因的交集；
(C)GHYSJ在治疗AD中的PPI网络分析。
2.GHYSJ和AD的GO和KEGG富集分析
利用Metascape数据库对AD调控的GHYSJ靶标进行信号通路分析，使用CytoScape软件构建GHYSJ组分-AD靶点-通路网络，经过一系列对比分析找到了与AD治疗相关的关键靶点为BACE1。
(A)GHYSJ和AD的生物过程（BP）富集分析；
(B)GHYSJ和AD的分子功能（MF）富集分析；
(C)GHYSJ和AD的细胞组分（CC）富集分析；
(D)GHYSJ和AD的KEGG富集分析；
(E)GHYSJ和AD的KEGG通路分类及总结分析；
(F)GHYSJ成分-AD靶点通路网络，颜色越深的节点越大，说明节点的显著性水平越高。
3.GHYSJ的活性成分（配体）与靶标（受体）之间的分子对接
分子对接分析显示GHYSJ的主要活性成分与AD相关的关键靶点之间有较强的结合亲和力。
(A)活性成分和靶标之间的分子对接分数；
(B)Liquiritigenin与BACE1之间的二维力和三维空间环境；
(C)人参皂苷Rh4和BACE1之间的二维力和三维空间环境。
4.大鼠海马、心、肝、脾、肺、肾的H&E染色
通过对大鼠组织进行H&E染色，证明了GHYSJ口服液对主要器官没有明显的病理变化，显示出良好的安全性。
(A)海马体，(B)心，(C)肝脏，(D)脾脏，(E)肺，(F)肾脏。上图为GHYSJ组，下面为正常组。
5.GHYSJ对Aβ损伤的SH-SY5Y细胞的药效学效应
通过体外细胞实验，发现GHYSJ中的Liquiritigenin和Ginsenosides Rh4，以及GHYSJ药物血清能够在Aβ诱导的SH-SY5Y细胞模型中显著下调BACE1表达。
(A)CCK8方法检测Aβ 25-35单独处理或Aβ 25-35与GHYSJ血清联合处理的SH-SY5Y细胞的细胞活力（5%、10%、20%）；
(B)流式细胞术分析Aβ 25-35单独处理或Aβ 25-35与GHYSJ血清联合处理的SH-SY5Y细胞的凋亡率（5%、10%、20%）；
(C)分别用Aβ 25-35和GHYSJ血清、Liquiritigenin、人参皂苷Rh4处理的SH-SY5Y细胞免疫荧光，用共聚焦显微镜的FV3000拍摄。
文章小结
该研究通过结合网络药理学和分子对接技术，不仅预测了GHYSJ的潜在作用靶点，还验证了其活性成分与这些靶点之间的直接相互作用，为中药复方的研究提供了新的视角。生信分析方法容易，实验难度也不高，可以说是极容易复现啦~对咋医生来说，网络药理学已经成了人手必会的技能！思路匮乏或者技术上难以复现的朋友可以来找馆长，方案设计和生信分析有我无忧！
馆长有话说
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