3. 关于上样
问题描述：
1）明明进行了归一化处理，实现了等量等体积上样，可总出现条带不均一的现象，内参怎么也跑不齐？
2)还没开始电泳样本就已经开始弥散了？
3) 刚加好的样怎么蔓延得到处都是，各泳道样品之间混成一片？
4)好不容易加好的样却被枪头带了出来？
5) 甚至样本残留在枪头中怎么也排不出去？
6) 样加进去了，可怎么沉不到泳道底，悬在半空中？
问题分析及解决方案：
1）蛋白样本最好在上样前进行混匀处理，因为loading buffer的密度大，会携带蛋白样本沉至底部，不混匀后期即便实现了等量等体积上样，吸取到的蛋白量也是不一致的，就会导致条带不均一，故而上样前的离心就非常重要，为以防万一还可涡旋混匀后再次离心哦；
2）上样顺序及速度也是关键，上样时间过久很容易造成蛋白样本的弥散，直接宣告实验的失败，因此，上样速度一定要快，切忌磨磨蹭蹭，此外，建议按照空孔中的loading buffer→蛋白Marker→实验样本的顺序进行加样，以防蛋白弥散；
3）加样时一定要小心，将枪头轻轻抵住长短玻璃板之间的间隙匀速排样，样本会在loading buffer的协助下沉底，切忌将整个枪头伸进去，这样很容易撬动短玻板，玻板与胶之间一旦出现间隙自然而然会使各样本之间混为一片，造成污染；
4）加样完毕后稍将枪头短暂停留几秒再取出，不要立即拿开枪头，否则枪头会将部分样本带出来；
5）加样过程中一定要规范使用移液枪，排样过程一定要按住按钮，切勿在排样过程中松动，否则直接造成电泳液倒吸，样本排不出去；
6）有时梳子与玻板之间密封不严密就会有部分胶体残留，影响上样，所以加样前最好先冲洗加样孔，可以采用移液枪冲洗，亦可采用注射器冲洗，但要注意不要太过用力以防损坏加样孔底部，进而造成条带不平齐；同时也要注意不要弄断加样孔之间的柱子，以防各加样孔之间的污染；
7）另外，在加样时还需要注意最好让电泳液没过加样孔再加样，加样完毕，补充电泳液时水流不可过大，且不可直接冲向加样孔，以防冲出样本。
4. 关于电泳
问题描述：
1）泳道总是跑斜？
2）loading buffer明明压成一条直线了，可在分离胶跑着跑着飘起来一层？
3）电泳跑着跑着发现仪器报警，电泳终止？
问题分析及解决方案：
1）加完样本后若有剩余的空加样孔，应当补以同体积的loading buffer，占用空泳道，否则泳道很容易歪斜；
2）我们在加loading buffer时一定要注意loading buffer常见的是5×的，所以无论是在上样孔还是空白孔，都需要稀释为1×的，否则在分离胶的时候loading buffer会飘起一部分；
3）在组装电泳内槽时也要注意检漏，先加入部分电泳液观察有无渗漏，倘若有渗漏就必须重新组装，否则会因电泳液不断的渗漏而直接造成短路，电泳停止。
此外，还需要注意胶板底部有气泡会影响电泳效果，因此注入电泳液时要尽量避免气泡产生，可以先将电泳槽稍加倾斜注入少许电泳液没过底部后再注入剩余电泳液，当然也要注意一定要在内槽注满电泳液。
往期文章：
本文作者是“夏沫梦鸢"同学，在获得授权后实验老司机将本文发表于公众号。
文稿：夏沫梦鸢
校对：煲仔饭
素材：Canva
参考资料：
https://images.app.goo.gl/X2u5dbdKAfabsA4V8
https://images.app.goo.gl/EkWFiz7dFZJdCRJS9
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