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细胞铺板是细胞生物实验起始的重要步骤，可以说是引领着一个细胞实验成败的关键！其基本原理是将一定数量的细胞均匀，密度合适的接种到培养皿中继续培养，以便后续进行一系列细胞实验。
图 1. 实验流程和操作步骤。
（Created with BioRender.com）
准备工作
收集细胞
3. 细胞消化：将细胞进行传代，弃去培养基，取适量的 PBS 轻轻润洗 2-3 次，吸尽上清。加入适量的胰酶置于 37℃ 培养箱中消化 (消化时间根据细胞类型而定)，待细胞皱缩且间隙变大、可从皿底滑落且不聚团成块时即可加培养基终止消化。
细胞计数
细胞铺板
图 3. HT-1080 细胞铺板 1 h 内拍照。
密度太大（左）和密度太小（右）
表 2. 不同直径的细胞铺板密度需求[1]。
小贴士：
接种密度：小细胞可以在相对较高的密度下生长，而大细胞需要较低的密度以避免接触抑制。
细胞形态：大细胞通常需要更多空间来扩展和生长。
时间和方法：大细胞细胞生长较慢，需要更长的时间来生长到可传代的状态。在处理和传代时，大细胞需要更温和以减少对细胞的损伤。
表 3. 不同实验类型的细胞铺板密度需求。
小贴士：如何铺的均匀？
答：“8” 字法 or 十字混匀法。
充分混匀细胞悬液后 (避免产生气泡)，用排枪吸取计数后一定体积的细胞，枪头与孔壁呈 45 ℃ 沿壁缓慢并均匀地将细胞悬液分配到每个孔中。若加样孔太多，建议每铺一部分及时混匀细胞悬液。在接种完成之后，盖上 96 孔板，静止 3-5 min。
2. 其他孔板或者培养皿：
8 字法：以 24 孔板为例，细胞铺完后，贴着水平桌面画 “8” 字轨迹，重复 5-6 次。
十字混匀法：以 24 孔板为例，细胞铺完后，贴着水平桌面先上下移动，再左右移动，呈十字形状，重复 5-6 次。
摇晃过程中应注意力度，防止培养基溅洒出来污染细胞哦~ 细胞易沉降，建议每铺一部分孔 (比如半块板)，及时混匀预先配制的细胞悬液，然后继续铺板。
铺完细胞后记得显微镜下观察确认细胞的均匀度和密度，如果你能观察到细胞“颗粒”分明、分布均匀且密度中等，那么恭喜你，细胞铺板工作你已经完美结束啦~赶紧将你的细胞放回恒温培养箱中继续培养啦！
图 5. 成功铺板后的 HT-1080 细胞 0 h（左）和 2 h（右）。
最后！！！千万不要铺完细胞就撒手不管啦~细胞也是有生命的，需要被时时“关爱”与“呵护”的哦~
定期使用显微镜观察细胞形态、增殖情况。 记录细胞生长曲线，评估实验效果。 根据实验目的，适时进行细胞处理 (如药物添加、转染等)，并继续观察细胞。
一、铺完细胞后状态不佳
二、细胞密度不均匀
三、细胞形态异常或死亡、凋亡
4. 在重悬和铺板过程中，强烈摇晃或过度机械性操作。
除了以上的秘密小技巧外，细胞铺板也离不开操作手法上的经验积累。希望能够帮助到每一位科研工作者顺利、圆满的得到自己想要的实验结果哦！
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