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图 1. Cre-loxP system[1]。
Cre 重组酶 (Cyclization Recombination Enzyme) 由噬菌体 P1 的环化重组酶基因产生的一个 38 kDa 的 DNA 重组酶，可以识别 loxP (locus of x-over, P1) 位点的特定 DNA 片段序列，并介导两个 loxP 位点之间 DNA 序列的位点特异性缺失。 loxP 位点是一个 34 bp 的序列，由两个 13 bp 的反转和回文重复序列和 8 bp 的核心序列组成。Cre-loxP 主要用于基因敲除，但它也会根据 loxP 位点的取向和位置诱导两个 loxP 位点之间的 DNA 反转和易位[1]。
为了提高他莫昔芬或 4-OHT 诱导的效率，在 CreERT 后产生 CreERT2，它在体内对 4-OHT 的敏感性约为 CreERT 的 10 倍。因此，CreERT2 在一些生物学领域更受青睐[2]。
▐ 诱导方法
Tamoxifen、四环素、多西环素均不溶于水，使用时注意使用助溶剂或超声助溶。
Tamoxifen 是 Cre-loxP 模型中最常用的化学诱导剂，不溶于水，一般溶于乙醇、玉米油或葵花籽油中使用，-20℃ 避光保存，使用前可 37℃ 下解冻并超声 5 分钟。
成年小鼠给药 Tamoxifen 剂量范围为 75 mg/kg~100 mg/kg，给药方式可以选择口服、灌胃或者腹腔注射，目前最常用的是连续5天腹腔注射的方式。 给药剂量和频率需根据实验动物的种类、年龄、体重以及实验目的等因素确定，并遵循实验动物伦理和实验规范[7][8][9]。
注意事项[8]
处理过的动物和未处理过的动物应分开饲养，关在同一个笼子里，可能会发生他莫昔芬交叉污染。舔舐油性他莫昔芬悬浮液，梳理或食粪行为可以引起基因敲除。 诱导后，需要等待一段时间 (如数小时至数天) 以允许 Cre 重组酶进入细胞核并发挥作用。 可以通过分子生物学和遗传学方法验证是否敲除成功。如：Western blot、PCR、测序、组织学检查。
