浙工大环境学院潘响亮团队WR: 柠檬酸亚铁强化好氧颗粒污泥氧化Mn(II)和As(III):胶体铁和胞外超氧自由基的关键作用

文摘   2024-11-18 17:02   陕西  

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第一作者:何崭飞

通讯作者:潘响亮

通讯单位:浙江工业大学

原文链接:

https://doi.org/10.1016/j.watres.2024.122705


图文摘要


成果简介


近日,浙江工业大学环境学院潘响亮团队在环境领域学术期刊Water Research上发表了题为“Enhanced oxidation of Mn(II) and As(III) by aerobic granular sludge via ferrous citrate: Key roles of colloidal iron and extracellular superoxide radical”的学术论文。在之前的反应器运行过程中,作者意外发现,向含有Fe(II)的废水中加入柠檬酸盐能够显著促进好氧颗粒污泥(Aerobic granular sludge, AGS)的锰氧化作用。在本项研究中,作者通过连续67天的反应器运行,验证了这一刺激效应。在进水中引入柠檬酸亚铁后,废水Mn(II)的去除率从21±4%跃升至87±7%,而As(III)的去除率也从77.1±1.8%提升至93.6±0.2%。通过基因组分析、无细胞滤液培养以及细菌纯培养,揭示了假单胞菌介导的一种新型锰氧化途径。首先,该细菌可能利用共转运蛋白CitMHS和三羧酸循环快速分解柠檬酸根,生成胶体铁。接着,胶体铁与胞外蛋白作用产生超氧自由基·O2。这些自由基负责将Mn(II)氧化为Mn(III),并最终形成锰氧化物(MnOx)。产生的MnOx能够快速将As(III)氧化为毒性较低的As(V)。这种柠檬酸亚铁刺激的锰氧化新途径,为水和废水中Mn(II)As(III)的高效去除提供了新的思路。

引言



在许多环境中,生物合成的锰氧化物(MnOx)在砷As)的转化与解毒过程中扮演着关键角色。这些无定形的MnOx因其大比表面积、高氧化还原电位和丰富的缺陷,对As(III)展现出极高的反应活性。剧毒的As(III)能够在MnOx表面被氧化成更易被吸附、毒性较低的As(V),从而实现砷的解毒。锰氧化菌(Manganese-oxidizing bacteria, MnOB)能够将溶解态的Mn(II)离子转化为不溶性的MnOxMnOB在分类学上展现出多样性,并且拥有多种锰氧化途径。锰氧化的酶促过程涉及两个单电子转移反应:首先,Mn(II)被氧化为Mn(III),随后Mn(III)进一步氧化或歧化形成Mn(IV)。在废水环境中,MnOB常常面临与土著优势微生物的竞争,这往往导致其数量和活性偏低。前期研究发现,在AGS颗粒中培养MnOB,可以一定程度上增强其生存能力。因此,刺激AGSMnOB的锰氧化活性对于加速MnOx的生物合成,以及有效氧化和去除废水中的As(III)至关重要。

这项研究的主要目的包括:(1)验证柠檬酸亚铁对AGSMn(II)As(III)氧化的刺激作用,并提出一种强化处理废水As(III) 的策略;(2)阐述柠檬酸亚铁刺激下细菌锰氧化过程中胞外·O2的作用;以及3)揭示柠檬酸亚铁刺激细菌锰氧化及随后砷氧化的潜在机制。

图文导读




在之前的反应器操作中,为了抑制亚铁离子的氧化和沉淀,向进水中添加了络合剂柠檬酸盐,意外发现柠檬酸亚铁复合物显著增强了AGS的锰氧化活性。在本项研究中,为了验证这一发现,运行了4个序批式反应器,其中包括2个重复的实验组和2个重复的对照组。定期监测了进水和出水的pH值、CODMn(II)、As(III)As(V)的浓度,以及污泥中MnOx、As(III)As(V)的含量,结果如图1所示。在加入柠檬酸亚铁后(从第二阶段开始),实验组的出水pH值迅速从7.28±0.04上升至约8.0(见图1a)。这一变化是由于柠檬酸盐降解过程消耗了H+离子,从而提高了溶液的pH值。值得注意的是,出水pH值始终在8.5以下,因此Mn(II)O2的化学反应可以忽略。实验组和对照组的COD去除率均较高,分别为95±1%94±1%(见图1b)。在第二和第三阶段,实验组的出水Mn(II)浓度持续降低至0.6±0.4 mg/L,去除率达到87±7%(见图1c)。而对照组的最终Mn(II)浓度为3.9±0.2 mg/L,去除率仅为21±4%。在图1d和图1e中,实验组的出水As(III)As(V)浓度明显低于对照组。实验组的最终As(III)去除率为93.6±0.2%,明显高于对照组的77.1±1.8%。在第二和第三阶段,实验组污泥中MnOx含量远超对照组(见图1f)。实验组的最终污泥MnOx含量为3.5±0.2 mgMn/g SS,约是对照组的两倍。此外,实验组的最终污泥As(III)As(V)含量也大约是对照组的两倍(见图1g和图1h)。上述结果证实了柠檬酸亚铁可以显著提高AGSMn(II)As(III)的氧化和去除效率。

图1:四个反应器的运行性能。进水和出水的pH值(a)、COD(b)、Mn(II)(c)、As(III)(d)和As(V)(e)浓度,以及污泥的MnOx(f)、As(III)(g)和As(V)(h)含量。反应器67天的运行期可分为三个阶段;在第二和第三阶段,实验组中添加了20 mg Fe/L的柠檬酸亚铁;在第三阶段,两组中均添加了2 mg/L的As(III)。

从实验组的最终污泥中分离获得了3个菌株,菌落照片见图2a。所有菌落均为棕色,并且可以用亮柏蓝染成蓝色,表明产生了MnOx。这3个菌株的锰氧化活性相似,没有显著差异(见图2b)。然而,菌株MnW5在底物利用方面具有明显优势。它能利用31种测试底物中的20种,而其他菌株只能利用610种底物(见图2c)。这表明菌株MnW5具有更高的代谢多样性和更强的环境适应性。细菌16S rRNA基因系统发育树显示,菌株MnW1MnW2MnW5分别隶属于Acinetobacter、LysinibacillusPseudomonas属(见图3d)。在实验组的最终污泥中,Pseudomonas的丰度为0.70%,远高于其他两个属(Acinetobacter 0.011%Lysinibacillus 0.014%)。菌株MnW5基因组的Circos图见图2e。结果显示,菌株MnW5拥有MCO基因(mnxGmcoA)、AHP基因(mopA)和砷抗性基因(arsR、arsB、acr3、arsCarsH)。其中,arsR是转录调节因子,arsBacr3编码砷酸盐转运蛋白,arsC(K00537)编码依赖于谷胱甘肽的砷酸盐还原酶。没有检测到与砷氧化相关的基因。这些结果表明,菌株MnW5可能具有强的砷抗性,能够排出As(III)和还原As(V),但不能氧化As(III)arsH基因编码ArsH酶,负责将亚甲基砷酸盐(MAs(III))转化为甲基砷酸盐(MAs(V)。值得注意的是,还检测到了柠檬酸盐转运相关的共转运蛋白CitMHS和三羧酸循环相关基因(例如sdh操纵子;三羧酸循环可降解柠檬酸盐),表明其能够降解柠檬酸盐。在图2f中,菌株MnW5MnOB模式菌株Pseudomonas putida GB-1Pseudomonas putida MnB1ANI值极高,达到99.996%。图2g是菌株MnW5GB-1之间的基因共线性图,表明它们具有高度一致的基因排列。

图2:MnOB菌株的代谢和基因组分析。3个MnOB菌株的菌落形态(a)、锰氧化活性(b)、底物利用能力(c)和16S rRNA基因系统发育树(d)。基于P. putida MnW5的基因组,绘制了基因组Circos图(e)、ANI分析图(f)和共线性图(g)。图(c)中的标签“10/31”表示测试了31种底物,其中10种可被利用;其他标签依此类推。


3显示了柠檬酸亚铁促进P. putida MnW5氧化Mn(III)As(III)的可能机制。一方面,柠檬酸根可以在不到4小时内被细菌迅速降解。膜通道蛋白CitMHS可能负责将柠檬酸亚铁转运到细胞质中,随后进入三羧酸循环,迅速分解为CO2,产生ATP和还原当量(NADHFADH2。另一方面,在柠檬酸根降解后,柠檬酸亚铁被转化为胶体Fe(II),胶体Fe(II)可以氧化成胶体Fe(III),随后聚集形成固体FeOx。胶体Fe(II)和胶体Fe(III)都能刺激细胞外蛋白产生·O2,其中胶体Fe(II)的刺激作用较强。生成的胞外·O2Mn(II)氧化为Mn(III),然后Mn(III)继续氧化或歧化形成胶体MnOx,最终形成固体MnOx。此外,胶体Fe(II)和胶体Fe(III)可能为·O2氧化Mn(II)提供了一个催化界面。MnOxH2O2分解中的催化作用常常被忽视,但它却在促进锰氧化中发挥了关键作用。在培养8小时后,产生的MnOx可催化H2O2快速分解,防止H2O2还原Mn(III)。这使得16小时后 H2O2平降低,锰氧化速率提高。溶解的As(III)最初被FeOx吸附,然后被MnOx氧化为As(V),产生的As(V)也可以被FeOx有效吸附。

图3:柠檬酸亚铁刺激P. putida MnW5氧化Mn(II)的新机制。柠檬酸亚铁中的柠檬酸根被细菌降解后,形成胶体Fe(II)和胶体Fe(III)。胶体铁刺激胞外蛋白产生·O2−,进而氧化Mn(II)为Mn(III),最终形成MnOx。As(III)可以被MnOx高效氧化,并最终被FeOx吸附,从而实现废水中As(III)的高效处理。




小结


反应器运行结果表明,柠檬酸亚铁能够有效促进AGSMn(II)As(III)的氧化和去除作用。添加柠檬酸亚铁后,废水Mn(II)的去除率从21±4%跃升至87%±7%As(III)的去除率也从77.1±1.8%提高至93.6±0.2%研究还发现,添加柠檬酸亚铁的同时补充外源MnOB是废水Mn(II)As(III)去除的最佳策略。从实验污泥中分离获得了菌株P. putida MnW5并对其进行了代谢和基因组分析,提出了一种新的锰氧化机制。首先,P. putida MnW5通过同向转运蛋白CitMHS将柠檬酸亚铁转运到细胞质中,随后通过三羧酸循环迅速降解。柠檬酸亚铁被转化为胶体铁和固体FeOx胶体铁刺激胞外蛋白产生·O2胞外·O2Mn(II)氧化为Mn(III)Mn(III)进一步转化为胶体态和固体态的MnOx最后,MnOx将有毒的As(III)转化为毒性较低的As(V)FeOx有效吸附As(III)As(V)从而实现废水中As(III)的高效去除。

主要作者介绍


何崭飞:博士,副教授,博士生导师,浙江工业大学环境学院。主要从事微生物成矿、土壤重金属修复、矿山废水重金属治理等系列研究工作,其中研发的“生物成矿颗粒污泥”技术在废水重金属去除、钝化和回收方面取得显著成效。主持国家自然科学基金面上项目、国家重点研发项目子课题、国家自然科学基金青年项目等国家级项目4项,参与国家重点研发、国家自然科学基金重点项目等国家级项目9项。在Water Research、Soil Biology and Biochemistry、Applied and Environmental Microbiology等学术期刊发表论文40余篇,其中第一或通讯作者30余篇,授权国家专利25项,其中发明专利10余项。联系邮箱:zhanfeihe@zjut.edu.cn

潘响亮博士,教授,博士生导师,浙江工业大学环境学院。主要从事环境修复技术、新污染物、减污降碳等方面的研究工作,所研发的多项重金属污染环境微生物修复技术进行了示范应用;主持国家重点研发计划项目、国家自然科学基金重点项目、863计划、973计划等项目和课题多项,在Science Bulletin,Water Research等期刊发表SCI论文近200篇,被引9000多次,H指数53;授权发明专利20多项。应邀担任中国土壤学会环境微塑料工作组委员会副主任。曾入选中国科学院百人计划,科技部科技创新推进计划(中青年科技创新领军人才)和国家“万人计划”科技创新领军人才。曾获中国科学院王宽诚西部学者突出贡献奖,中国科学院朱李月华优秀教师奖,中国科学院优秀导师奖。联系邮箱:panxl@zjut.edu.cn


来源:浙江工业大学潘响亮团队

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编辑 | 杜瑛、汤皓婷


校对 | 刘喆、刘文如、韩昫身


校核 | 刘喆、刘文如、韩昫身

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