第1章 发酵工程

1、腐乳制作中利用了哪些微生物？主要的是什么微生物？原理是？

 ①酵母菌、曲霉、毛霉  ② 主要是毛霉    ③原理是 蛋白质被蛋白酶分解为小分子肽和氨基酸

2、传统发酵主要什么类型的发酵？

混合菌种的固体及半固体的发酵

3、分别写出泡菜、果酒、果醋制作利用的微生物名称？是真核还是原核？代谢类型？温度？

泡菜 乳酸菌  原核生物  异养厌氧型     （不要求记）

果酒 酵母菌  真核生物  异养兼性厌氧型  18~30°C

果醋 醋酸菌  原核生物  异养好氧型      30~35°C

4、写出果酒酿制的反应式；果醋反应式（糖源不充足的情况）

果酒：C₆H₁₂O_{6 →}2C₂H₅OH +2CO₂ +能量 _；     

果醋：C₂H₅OH +O₂ → CH₃COOH +H₂O +能量

5、果酒的制作中菌种来源？每隔12h排一次二氧化碳，如何操作？

  ①果皮表面附着的不同种类的野生型酵母菌  ②拧松瓶盖  

6、培养基的成分一般都含有什么？根据物理状态可分为？区别是什么成分？

  ①培养基一般都含有 水、无机盐、碳源、氮源  ②固体培养基和液体培养基 ③区别是是否含有琼脂

7、无机碳源可以培养什么微生物？不加氮源可以培养什么生物？培养细菌一般培养基PH要呈？

 ①无机碳源可以培养自养型微生物 ②不加氮源可以培养固氮菌 ③一般培养基PH要呈中性或弱碱性

8、消毒的原理，及常见方法及对应物品？

消毒是用较温和的物理、化学、生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物

巴氏消毒法    牛奶等不耐高温的液体（能杀死牛奶中绝大多数微生物，并且基本不会破会牛奶的营养成分）

煮沸消毒法    家庭餐具等

紫外线消毒    接种室、超净工作台等

化学药剂消毒  皮肤、伤口等

9、灭菌的原理，及常用的方法及对应物品？

灭菌是用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

灼烧灭菌    接种环、涂布器、试管口及金属用具

干热灭菌    耐高温的、需要保持干燥的物品如玻璃器皿、金属用具等

湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）  培养基

10、倒平板后为什么要倒置？

  ①防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染   ②防止水分过快蒸发

11、常用的接种方法有几种？能否获得单菌落？能否计数？

   ①平板划线法、稀释涂布平板法  ②都可获得单菌落  ③稀释涂布平板法可计数

12、如何判断培养基灭菌是否彻底？

 将空白平板置于恒温培养箱中培养，观察是否有菌落长出

13、什么叫选择培养基？尿素分解细菌为什么可以利用尿素？如何筛选？

   ①允许特定微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基

   ②因为尿素分解细菌可以分泌脲酶，将尿素分解产生NH_3，为其提供氮源

   ③配置以尿素为唯一氮源的培养基，接种样品进行筛选

14、计数微生物的方法？两种方法的比较

  ①稀释涂布平板法（活菌计数法）、显微镜直接计数法（用血球计数板或细菌计数板）

  ②(1) 稀释涂布平板法计数，能直接区分活细胞和死细胞，但是计数结果偏少

(2) 显微镜直接计数法，不能直接区分活细胞和死细胞，除非用染色剂，如台盼蓝

15、稀释涂布平板法计数的原理？结果偏小的原因是什么？

  ①当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌

②当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落

16、稀释涂布平板法计数时为什么选择菌落数稳定时的记录作为结果？

  防止因培养时间不足，导致菌落遗漏

17、发酵工程的基本环节是什么？发酵时要随时检测什么？要严格控制什么？

①发酵  ②随时检测培养液中微生物数量、产物浓度等  ③严格控制温度、pH、溶解氧等

18、发酵产品可以是什么？单细胞蛋白是什么？

  ①发酵产品可以是微生物细胞本身、微生物的代谢物

  ②大量的微生物菌体

第2章 细胞工程

植物细胞工程

1、植物组织培养的过程 

2、植物组织培养中生长素和细胞分裂素比值对诱导结果的影响？

  ①比值高有利于根的分化     ②比值低有利于芽的分化     ③比值适中促进形成愈伤组织

3、植物组织培养的过程哪个阶段不需要光照？

  脱分化，即形成愈伤组织的阶段

4、植物体细胞杂交技术中，去除细胞细胞壁用什么？诱导原生质体融合的方法有哪些？体细胞杂交的原理是什么？植物体细胞杂交技术的优点？

①去除植物细胞壁用纤维素酶和果胶酶

②诱导原生质体融合的方法有：离心、电融合、PEG、高Ca^{2+ __}高pH.

③体细胞杂交的原理是:细胞膜的流动性和植物细胞全能性

④植物体细胞杂交技术的优点是打破生殖隔离，实现远缘杂交育种

5、培养脱毒苗的原理？

  植物顶端分生区附近的病毒极少，甚至无病毒

6、单倍体育种的步骤和原理及优点？

①步骤：先花药离体培养，再用秋水仙素加倍  

②原理：植物细胞的全能性和染色体变异

③优点：明显缩短育种年限；一般培育出的是稳定遗传的纯合子

7、细胞产物的工厂化生产中，一般培养到哪个阶段？

  一般将外植体脱分化形成愈伤组织，再将愈伤组织制成细胞悬液进行培养，提取产物

动物细胞工程

1、动物细胞培养的条件有哪些？

(1) 营养条件:除各种营养物质外还要加血清等天然成分

(2)无菌无毒:培养液和用具无菌处理，定期更换培养液，以便清除代谢废物，防止细胞代谢物积累对细胞造成危害

(3)温度、pH和渗透压：温度:36.5     pH7.2~7.4

(4) 气体环境：95%空加5%CO₂,     CO₂主要维持培养液的pH。

2、动物细胞培养过程中，细胞的两种生长方式是？哪一种是常见类型？

悬浮生长和贴壁生长；                      贴壁生长

3、动物细胞培养过程中，悬浮生长和贴壁生长的细胞分裂受阻的原因分别是？

  悬浮生长：细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏

  贴壁生长：细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏、接触抑制

4、悬浮生长和贴壁生长的细胞分裂受阻后进行分瓶培养，怎么收集细胞？分瓶后的培养叫什么？

  ① 悬浮生长：离心法收集   贴壁生长：先用胰蛋白酶处理，再离心法收集   ②分瓶后叫传代培养

5、干细胞的种类？干细胞的来源？诱导iPS的方法有？

胚胎干细胞和成体干细胞等  

胚胎干细胞来源于早期胚胎，成体干细胞中的造血干细胞来源于骨髓和脐带血、外周血等

借助载体将特定基因导入细胞；直接将特定蛋白导入细胞；用小分子化合物诱导

6、传统方法如何生产抗体？    生产抗体的缺点是？

从动物血清中分离           产量低、纯度低、特异性差

7、单克隆抗体的制备中第一次、第二次筛选分别用什么方法？

① 第一次筛选：用特定的选择培养基，只有融合的杂交瘤细胞才能生长

② 第二次筛选：克隆化培养和抗体检测，获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。技术：抗原—抗体杂交技术

8、单克隆抗体的优点？

  ①能准确地识别抗原的细微差异  ②与特定抗原发生特异性结合 ③可大量制备

9、单克隆抗体的应用？

  ①作为诊断试剂盒  ②运载药物，如ADC  ③治疗疾病

10、诱导动物细胞融合的方法有？

PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法

10.1、核移植技术中，受体细胞选择MⅡ期卵母细胞的原因？

细胞体积大，易操作；卵母细胞中含有激活细胞全能性表达所需的物质

10.2激活重构胚的方法？

电刺激、Ca²⁺载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂

11、动物克隆的成功证明了？

证明了已经分化的动物细胞的细胞核具有全能性

12、受精的准备包括什么？受精的场所？人工配置的精子获能液的有效成分？

①包括精子的获能和卵子的成熟（MII期） ②受精的场所是输卵管  ③肝素和Ca²⁺ 载体

14、防止多个精子进入卵细胞的两个反应分别是？

透明带发生生理反应、卵细胞膜发生生理反应

15、受精的标志？受精完成的标志？

受精的标志：观察到2个极体或者雌、雄原核

受精完成的标志：雌雄原核融合

16、早期胚胎发育的特点?什么时期开始分化？

细胞数量不断增加，胚胎总体积并不增加。    囊胚期开始分化

17、囊胚的结构？

滋养层（发育为胎盘和胎膜）、内细胞团

18、什么叫孵化？

囊胚从透明带中伸展出来

19、胚胎移植前要对供体和受体进行什么处理？为什么？如何处理？

  ①进行同期发情处理   ②保证供体与受体的生理状态一致   ③用性激素处理

20、供体母牛还要进行什么处理？如何处理？

  ①超数排卵   ②用促性腺激素

21、胚胎移植的优势？

充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力

22、胚胎分割可选择什么阶段的胚胎？需要注意的问题是？

  ①发育良好的桑葚胚或囊胚   ②选择囊胚阶段的胚胎时，要注意将内细胞团均等分割

23、通过胚胎分割产生的胚胎是什么繁殖方式？若进行性别鉴定，选择什么细胞？

①属于无性繁殖或者克隆    ②选择滋养层细胞

第3章 基因工程

1、基因工程的操作原理、操作对象、操作水平、优点分别是什么？

操作原理一基因重组；操作对象一基因；操作水平一分子水平；优点：定向改造生物的性状，打破生殖隔离

2、基因工程的三种工具分别是什么？

限制酶、DNA连接酶、载体

3、限制酶的来源？作用的结果是什么？为什么不切割原核细胞中的DNA?

来源主要来自原核生物；结果是产生黏性末端或平末端；

含某种限制酶的细菌的DNA分子不具备这种限制酶的识别序列，或者甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开

4、DNA连接酶的作用和种类？

①作用：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

②种类：E.coli DNA连接酶，来源于大肠杆菌，只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来

        T4 DNA连接酶，来源于T4噬菌体，既可以连接黏性末端，又可以连接平末端，但连接平末端的效率相对较低

5、能做用于磷酸二酯键的酶有哪些？作用于氢键的酶有哪些？

 DNA聚合酶、DNA连接酶、限制酶、DNA水解酶、逆转录酶；氢键的酶是DNA解旋酶

6、载体的种类有哪些?

质粒、噬菌体、动植物病毒等

7、常用载体—质粒的本质是什么？

质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子

8、质粒作为载体所具备的条件及原因

9、基因工程的基本操作程序是？

(1)目的基因的筛选与获取

(2)基因表达载体的构建

(3)将目的基因导入受体细胞

(4)目的基因的检测与鉴定

10、获取目的基因的方法有什么？

(1)人工合成目的基因

(2)常用PCR特异性地快速扩增目的基因

(3)通过构建基因文库来获取目的基因

11、PCR的原理和需要的基本条件分别是什么？

（1）DNA半保留复制。

（2）基本条件

①场所：一定的缓冲溶液中，一般要添加Mg^2＋

②模板：DNA母链

③原料：4种脱氧核苷酸

④酶：耐高温的DNA聚合酶

⑤引物：2种

12、PCR的过程和产物的鉴定分别是？

（1）过程

①变性：当温度超过90 ℃时，双链DNA解聚为单链

②复性：当温度下降到50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合

③延伸：当温度上升到72 ℃左右时，4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链

（2）鉴定：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物

13、基因表达载体构建的目的是什么？

让目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用

14、基因表达载体的组成包括什么？

15、基因表达载体的构建过程是什么？

(1)首先用一定的限制酶切割载体

(2)然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段

(3)再利用DNA连接酶将含目的基因的DNA片段拼接到载体的切口处

16、用不同的限制酶切割质粒和目的基因的优点是什么？

可以防止质粒和目的基因的自身环化；以及目的基因与载体的反向连接

17、将目的基因导入动物细胞的方法和常用的受体细胞？

①方法：显微注射技术

②受体细胞：受精卵

18、将目的基因导入微生物细胞的方法和常用的受体细胞

①常以大肠杆菌作为受体细胞

②一般先用Ca^2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。

19、将目的基因导入植物细胞的方法有哪些?

①花粉管通道法（我国科学家独创）

②农杆菌转化法(主要适用于双子叶和裸子植物)

a．转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

b．原理：农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T­DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上

20、目的基因的检测与鉴定如何进行？

(1)分子水平的检测

①通过PCR等技术检测受体细胞的染色体DNA上是否插入了目的基因

②利用PCR技术检测目的基因是否转录出了mRNA

③用相应抗体进行抗原—抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质等

(2)个体生物学水平的鉴定：抗虫、抗病接种实验等

21、乳腺生物反应器的构建，受体细胞是什么？有什么限制？

 受体细胞是受精卵；发育出的个体必须是雌性个体

22、乳腺生物反应器中目的基因为什么只在乳腺细胞中表达？

因为目的基因前的启动子是乳腺中特异表达的基因的启动子

23、与大肠杆菌相比，用酵母菌生产人的胰岛素有什么优势？

　酵母菌为真核生物，可通过内质网和高尔基体对产生的胰岛素进行加工和修饰，从而产生有活性的胰岛素

24、琼脂糖凝胶电泳的原理和影响迁移速率的因素有哪些？

原理：在电场的作用下，带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动

影响迁移速率的因素：凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象

25、DNA的粗提取的原理是？

利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。如：

(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精

(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2_mol/L的NaCl溶液

26、鉴定DNA的原理是什么？

在沸水浴加热下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色

27、不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是什么？

哺乳动物成熟的红细胞无细胞核

28、利用植物细胞和动物细胞提取DNA破碎细胞的方法有什么不同？

植物细胞需要研磨破碎细胞，动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破

29、蛋白质工程的直接操作对象和基本思路是什么？

直接操作对象：基因（进行改造或合成新基因）

基本思路：预期的蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→获得所需要的蛋白质

30、蛋白质工程的结果是什么?

改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质 

第4章 生技术的安全性和伦理问题

1、转基因中为什么常对微生物进行基因改造？

微生物具有生理结构和遗传物质简单、生长繁殖快、对环境因素敏感和容易进行遗传物质操作等优点

2、生殖性克隆与治疗性克隆的区别是什么？

(1)生殖性克隆：通过克隆技术产生独立生存的新个体 

(2)治疗性克隆：利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的

3、试管婴儿与设计试管婴儿有什么异同？ 

4、生物武器的种类和特点分别是什么？

种类：致病菌类、病毒类和生化毒剂类等，如天花病毒、波特淋菌、霍乱弧菌和炭疽杆菌等 

特点：致病能力强、攻击范围广