怎样避免HPLC缓冲盐析出?

学术   2024-11-21 20:35   北京  

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 液相色谱如果操作不当,会出现盐析堵塞的情况,可能会堵塞管路,需要逐段去排查,让多数实验人员头疼,我们最好能避免盐析的发生。

  1. 当缓冲盐浓度较高时(50mM以上),可以在有机相中添加一定比例的水(如乙腈/水-80:20),避免梯度最后有机相比例过高,造成盐析。
  2. 如果是夜间排样,最好用四元系统,另外两相有纯水相,序列最后调出高比例水相的冲系统方法。
  3. 如果使用的是二元液相系统,晚上做完实验后要切换到小流速 (如0.1mL/min)冲洗过夜,冲洗方法中柱温箱要保持温控。
  4. 没有柱温箱的话可以加装柱温箱,夜里也要开空调保持房间恒温25℃左右,低温更容易发生盐析。
  5. 因为平时色谱柱使用后都会使用纯有机相封柱保存,建议凡是用到缓冲盐类流动相,实验前或实验后,都要使用高水相(如10%甲醇水)进行冲洗10倍柱体积以上(如1mL/min流速冲30分钟以上),冲洗时不要关闭柱温箱。
  6. 使用在有机溶剂中有一定溶解性的缓冲盐,比如乙酸铵。
  7. 使用与水混合放热的有机溶剂,比如甲醇。

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