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寡核苷酸的色谱分析方法总结

学术 2024-12-15 19:10 北京

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寡核苷酸：由100个以内的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸单链或双链组成的核苷酸，也称为寡核苷酸药物。寡核苷酸药物主要是通过碱基互补配对原则与DNA、mRNA或者pre-mRNA配对，通过基因沉默、非编码RNA抑制、基因激活等一系列机制来调节基因表达。

寡核苷酸的色谱分离方法目前已经比较成熟：①反相离子对色谱法；②阴离子交换色谱法；③HILIC色谱法

1. 反相离子对色谱（IP-RP）

寡核苷酸属于酸性强极性化合物，在一般反相色谱柱上很难保留。所以我们需要加入离子对试剂来进行离子对反相色谱分析。寡核苷酸分析常用的离子对试剂主要有醋酸-三乙胺（TEAA）、碳酸-三乙胺（TEAB）、六氟异丙醇（HFIP）-三乙胺

案例1，寡核苷酸n和n+1的分离，C18色谱柱，3um，4.6*150mm，流动相：100mM TEAA水溶液（pH7.0）和甲醇

2. 阴离子交换色谱（AEX）

由于寡核苷酸药物骨架上的磷酸基团上带负电荷，因此AEX也是寡核苷酸杂质分析和含量检测的常用方法。

案例2，寡核苷酸n和n+1的分离，WAX色谱柱，5um，4.6*250mm，流动相：20mM Tris-Hcl水溶液（pH8.0）和1M氯化钠溶液

3. 亲水相互作用色谱法（HILIC）

可以避免离子对试剂的使用，选用兼容质谱的流动相，实现寡核苷酸的多种检测器检测。

案例3，分离一磷酸核苷和二磷酸核苷，Hilic色谱柱，5um，4.6*250mm，流动相：20mM乙酸铵水溶液和乙腈

寡核苷酸药物的分析，有时也需要多种方法同时去正交分析，因为不同的方法选择性不同，对各组分的分离情况有差异。

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