分析物的pKa决定了流动相pH的选择
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2024-12-03 19:10
天津
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“ 在HPLC方法开发过程中，我们常会调节流动相的pH，来增加化合物的保留或改善峰形。”① 使得易离子化的化合物保持分子状态，可以与反相固定相的疏水键合相之间产生疏水吸附作用，得以保留在固定相；② 屏蔽硅胶基质的硅羟基的次级保留效应，改善峰型拖尾。我们分析的化合物通常都会有一个或多个酸性或碱性官能团，使得化合物在溶液中有一个解离常数pKa，也就是酸度系数。我们用反相色谱分析这种易离子化的化合物时，需抑制其电离，才能在色谱柱上有所保留。分酸碱两种情况：① 如果是分析酸性化合物，流动相的pH应低于其pKa至少2个pH单位；② 如果是分析碱性化合物，流动相的pH应高于其pKa至少2个pH单位。也就是酸在更酸的条件下保留更强，碱在更碱的条件下保留更强。如下图
反相C18、C8，或者其他疏水键合相，一般是在硅胶基质上，将十八烷基氯硅烷键合到硅羟基上，但由于硅胶本身的微孔结构和十八烷基的长链空间位阻，导致部分硅羟基不能被十八烷基键合，裸露的硅羟基使得硅胶表面略显酸性，对一些碱性化合物会产生次级吸附作用，造成拖尾的情况。
我们要屏蔽硅羟基的次级作用，可以在流动相中加入酸或者碱。加的酸需强过硅羟基的酸性。碱性扫尾剂一般用三乙胺，但三乙胺不建议长时间保存在色谱柱中，三乙胺会降低色谱柱寿命。
