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今天的问题是让说一说细胞手工计数的问题，在实习时候或者刚上班的时候还是经常使用，后来有仪器以后使用的机会就较少了，但是在平时工作中，对于无法仪器计数和需要手工计数的体液还是需要这个计数板的，今天就来说说这个计数板的问题，看看是不是你想要的答案。★最初的计数板是一个“H”形的凹槽，分为两个计数池（下图左侧，看着都快成为古董了），新型的计数板为一次性的计数板，用完不需要清理直接扔点即可（下图游侧）。★计数板相关参数：计数池长、宽各3mm，计数池高度为0.1mm，平均分成9个大方格，每个大方格为0.1μl（mm3）。★四角的四个大方格分别用单线划分成16个中方格（这种中方格的容积为0.00625ul），是白细胞计数区域（ABCD），中央的大方格用双线条划分成25个中方格（这种中方格的容积为0.004ul），每个中方格又用单线划分成16个小方格（容积为0.00025ul），其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域（EFGHI）。★计数中需要注意的问题：计数时按照一定的顺序计数整个方块内的细胞，计数原则对于压边的细胞，数上不数下，是左不数右（下右图中计数黑色的点不计数白色的点），对于少量细胞聚集成细胞团的计数按照一个细胞计数。★在2ml红细胞稀释液中加血10ul（稀释倍数为200倍），混匀后，充入计数池，静置3~5分钟后，在高倍镜下，计数中央大方格内4角和正中共计5个中方格内的红细胞数。★公式：红细胞/L=Nx5x10x10^6x200=(N/100)x10^12。N为中央大方格内4角和正中共计5个中方格内的红细胞。其中×5（其实是25/5）是将5个中方格的红细胞数换算为1个大方格的红细胞数，后面×10是将1个大方格（0.1ul）的红细胞数换算为1.0ul中的红细胞数，在后面×200是血液的稀释倍数（实际上是201，这里用200是便于计算），最后再×10^6是将1.0ul换算为1L，★最常用的红细胞稀释液是Hayem液，不过全国临床检验操作规程（第4版）指出，若暂无Hayem液，可以用无菌生理盐水替代。★通常白细胞总数较少，仅相当于红细胞的1/500~1/1000，对结果影响很小，可以忽略不计，白细胞过高者(WBC>100x10^9/L)，红细胞计数结果应进行校正。校正方法有两种，一种是直接将患者红细胞数减去白细胞数，另外一种是在高倍镜下勿将白细胞计入，白细胞体积常比红细胞略大，中央无凹陷，细胞核隐约可见，无黄绿色折光。★20μl的EDTA抗凝全血或末梢血，加白细胞稀释液0.38ml（相当于稀释20倍），混匀，待红细胞完全破坏，液体变成棕褐色后，再次混匀充池，静置2-3分钟，待白细胞下沉后低倍镜计数四角4个大方格的白细胞数。★公式：白细胞/L=（N/4）x10x20^6=(N/20)x10^9。N表示4个大方格内的白细胞总数，后面的÷4是每个大方格（即0.1ul）中的白细胞平均数，后面的×10是将1个大方格（0.1ul）的白细胞数换算为1.0ul中的白细胞数，后面的×20是血液的稀释倍数，最后面的×10^6是将1.0ul换算为1L。★白细胞稀释液是冰醋酸/亚甲蓝（或者结晶紫）溶液。由于白细胞个人差异较大，因此其稀释倍数需要进行适当的调整，若白细胞计数超过15×10^9/L，可扩大稀释倍数或减少取血量,超过30×10^9/L，可100倍稀释（如取10ul血，加0.99ml稀释液）,若白细胞计数低于3×10^9/L，可计数8个大方格的白细胞数或减少稀释倍数，如10倍稀释（取20ul血，加入0.18ml稀释液）。★取20μl血，加入0.38ml的血小板稀释液中，混匀，待完全溶血后再混匀1分钟，充池，静置10-15分钟，高倍镜计数中央大方格内四角和中央五个中方格内血小板数。★公式：血小板数/L=N×5×10×20×10^6=N×10^9/L，其中N表示5个中方格内的血小板总数，后面的×5是将5个中方格的血小板数换算为1个大方格的血小板数，在后面的×10是将1个大方格（0.1ul）的血小板数换算为1.0ul中的血小板数，在后面的×20是血液的稀释倍数，最后的×10^6是将1.0ul换算为1L。★血小板稀释液是草酸铵溶液（含有EDTA-Na2），当EDTA依赖性假性血小板减低在无法纠正时可选择采用手工计数的方法进行计数，在大血小板或者小红细胞干扰血小板计数时可现在手工计数。★对于非血性标本，用小试管加入冰醋酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰醋酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液3-4滴，数分钟后充池按照白细胞计数法计数。对于浑浊或血性标本，将脑脊液用1%的冰醋酸酸溶液按照白细胞计数法稀释后进行计数，为剔除因出血而来的白细胞，用公式进行校正，脑脊液白细胞校正数=脑脊液白细胞计数-出血增加的白细胞数（出血增加的白细胞数=外周血白细胞数×脑脊液红细胞数/外周血红细胞数）。★虽然检验仪器已经十分发达了，但不要忘记最初的检测方法，这些基础的方法相对粗糙，但在任何时候都会稳定帮你解决棘手的问题。★对于体液的白细胞计数问题，仪器还有一些是解决不了的，依旧建议对于体液的白细胞计数采用手工计数法为好。★对于细胞计数器要活学活用，其也可以用在计数有多少活体细胞和死亡的细胞，这个时候需要的是细胞活体染色液，比如台盼蓝。★收集一下实验室的“老古董”，它们也可能有发光的时候。司南说：仪器在先进也不要忘记最基础的方法，也许最基础的方法在紧急时候能帮助你解决疑难杂症，不多说了，最后还是那句话，对于检验而言细节决定成败，检以求真，验以正德！说明：由于笔者知识储备有限、经验有限，本文主要是整理以往的资料与实际应用中的经验，仅供交流、学习与分享使用，原版版权归原作者所用，内容不作为临床诊疗依据，如有错误请私信笔者，非商业用途，仅供专业人士参考与交流，如有侵权请与笔者联系进行删除操作，谢谢！
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