今日施行!GB 4789.35-2023《食品微生物学检验 乳酸菌检验》标准解读

学术   2024-03-06 22:15   浙江  


2023年9月25日,国家卫生健康委发布85项新食品安全国家标准,其中微生物检验方法标准《食品安全国家标准 食品微生物检验乳酸菌检验》(GB 4789.35-2023)将替代GB 4789.35-2016,于2024年3月6日起正式实施。


与GB 4789.35-2016相比,GB 4789.35-2023主要变化如下:


1、修改乳酸菌的定义;

2、修改设备和材料;

3、修改培养基和试剂;

4、修改样品制备内容;

5、修改培养条件;

6、增加实时荧光PCR方法为选做方法。


一、乳酸菌定义

旧标准描述了乳酸菌是一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌通称,主要为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌。

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


新标准增加了对乳酸菌生化现象的描述:不能液化明胶、不产生吲哚、革兰氏阳性、无运动、无芽孢、触酶阴性、硝酸还原酶阴性及细胞色素氧化酶阴性反应的细菌。

GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


二、设备和材料

1、增加样品处理、培养所用的设备和材料:厌氧培养装置(厌氧培养箱、厌氧罐、厌氧袋或能够提供同等厌氧效果的装置)、涡旋混匀仪、恒温水浴锅或金属浴;

2、增加实时荧光PCR法的设备和材料:实时定量PCR仪、离心机、微量移液器和灭菌吸头、PCR管;

3、冰箱温度范围由 2℃~5℃ 改为 2℃~8℃;

4、电子天平感量由0.01g调整为0.001g。

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


三、培养基和试剂

1、新标准用稀释液代替旧标准的生理盐水。稀释液主要成分为NaCl和胰蛋白胨;

2、修改MRS琼脂培养基和MC琼脂培养基部分成分含量;

3、增加实时荧光PCR法的试剂:DNA提取液、10×PCR缓冲液等。

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


四、样品制备

1、增加稀释液预热步骤:稀释液在试验前应在 36℃±1℃ 条件下充分预热15min~30min;

2、液体样品处理步骤中,增加拍击式均质器拍打的操作;

3、增加:经特殊技术(如包埋技术)处理的含乳酸菌食品样品应在相应技术/工艺要求下进行有效前处理。

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


五、培养条件

1、新标准要求倾注的培养基温度在48℃~50℃范围,倾注的量在15mL~20mL范围。旧标准要求倾注的培养基温度为48℃,倾注的量为15mL

2、新标准根据双歧杆菌、嗜热链球菌、乳杆菌的生长特性,选择36℃±1℃厌氧/需氧培养48h,若菌落无生长或生长较小可选择延长培养至72h。旧标准双歧杆菌、嗜热链球菌、乳杆菌统一选择36℃±1℃厌氧/需氧培养72h±2h

GB 4789.35-2016《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》


六、实时荧光PCR法

旧标准乳酸菌的鉴定(可选做)只有生化鉴定法,新标准增加了实时荧光PCR法鉴定,可鉴定常见的干酪乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜酸乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌和嗜热链球菌,有较高的准确性和特异性,客户可以根据需求选择适宜的检测方法。

GB 4789.35-2023《食品安全国家标准 食品微生物检验 乳酸菌检验》



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