科研笔记(四)|如何做好THP-1的细胞培养与基因编辑

文摘   2024-12-24 18:05   广东  

THP-1细胞是一种人单核细胞白血病细胞系,源自一位急性单核细胞白血病患者的外周血液,于1980年被建系,属于悬浮细胞。THP-1细胞具有类似人原代单核细胞的形态和功能特征,包括细胞分化标记。它们可以被诱导分化成单核/巨噬细胞,因此常被用作体外细胞模型,用于研究单核/巨噬细胞的功能、机制和信号通路等,尤其在免疫学和毒理学研究中应用广泛。



THP-1细胞小卡片

细胞名称:THP-1(人单核细胞白血病细胞系)

赛业OriCell®细胞货号:H3-0901

赛业OriCell®培养基货号:CMH3-0901(500mL),DMH3-0901(200mL)

生长特性:悬浮圆形生长,偶有小聚团属于正常现象

培养条件:RPMI-1640+10%FBS+0.05mM β-mercaptoethanol

培养环境:95%空气+5%二氧化碳;37℃


THP-1细胞镜下形态


THP-1细胞对乳胶微粒和致敏红细胞有吞噬作用,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR,并可在化学诱导剂的诱导下分化成为巨噬细胞,模拟体内单核细胞向巨噬细胞的转化过程。该细胞也可作为转染宿主,常用于免疫学和毒理学研究。


THP-1细胞应用方向

➢巨噬细胞分化模型

可以通过特定的化学诱导剂如佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞。这些分化后的巨噬细胞可以进一步极化为M1型(促炎)或M2型(抗炎)巨噬细胞,用于研究巨噬细胞在炎症反应、免疫调节和抗肿瘤等方面的功能。


➢炎症模型

THP-1细胞来源的M1型巨噬细胞是一种典型的炎症模型,能够通过合成和分泌促炎因子如IL-1β、IL-6、TNF-α等介导炎症反应。


➢免疫调节

THP-1细胞系被广泛用于研究免疫调节方法,包括评估化合物在激活和静止状态下的免疫调节作用。


➢毒理学研究

THP-1细胞系可用于识别潜在致敏或炎症化合物的毒理学研究,尤其是在研究免疫调节方法的体外细胞模型方面


➢基因编辑模型

通过基因编辑技术,THP-1细胞可以被用来构建基因敲除模型,以研究特定基因在免疫和炎症疾病中的作用


➢肿瘤相关研究

THP-1细胞系还可以用于肿瘤相关研究,例如通过敲除特定基因如CXCR4,研究其对乳腺癌细胞迁移的影响。



THP-1细胞培养

该细胞在培养过程中,可能会有少量细胞聚集成小团生长,属于正常现象。传代时可以轻轻打散,如少许细胞已贴壁则传代时丢弃,小团生长的细胞可正常传代培养。传代时可以使用半换液法。


细胞培养步骤

➢细胞复苏

  ●取6mL完全培养基于离心管中开始复苏;

  ●水浴锅融化至米粒大小冰块,终止水浴;

  ●转移至离心管中离心;

  ●重悬细胞后接种于面积较小的孔板中;

  ●24h后观察细胞存活情况,细胞状态恢复之前不用换液。


➢细胞传代

  ●轻轻摇晃使细胞分散均匀,再吸取一半的培养基至新的培养皿中;

  ●原培养皿和新的培养皿再加入等体积的新鲜培养基;

  ●半换液法传代1-2次后需离心传代。


➢细胞冻存

  ●收集细胞至离心管中,离心;

  ●加入冻存液重悬细胞,转移至冻存管中;

  ●冻存管放入4℃预冷的程序性冻存盒,再放入-80℃冰箱过夜;

  ●第二天转移至液氮保存。


细胞培养注意事项

● 对培养密度较为敏感,培养、传代时请注意保持细胞密度在合适的范围,不可太稀;

● 复苏后尽量接种至面积小一些的孔板中,有利于细胞恢复状态;

● 冻存时需提高密度,建议3-5×106细胞量冻存一管,冻存前一天换液;

● 避免频繁离心换液。



利用赛业智能的基因编辑系统

进行基因编辑THP-1细胞系

基因修饰项目

THP-1细胞系的基因修饰包括基因敲除、点突变、基因敲入、过表达和干扰等,赛业生物通过优化THP-1的转染条件,实现THP-1基因编辑单克隆交付,可显著提高实验的准确性和可靠性,为科学研究提供更坚实的基础。


➢基因敲除

基于智能的细胞基因编辑系统,赛业生物可提供THP-1的KO细胞定制服务,交付单克隆纯合子。我们使用优化的转染体系将RNP直接递送到细胞内,gRNA切割效率高达90%以上相比于质粒和病毒等介导的方法,切割效率提升明显,脱靶效率明显降低,能更精准地切割目标DNA序列。


➢点突变

基于智能的细胞基因编辑系统,我们可提供精准、高效的THP-1定点突变和KI细胞定制服务。通过优化的α-donor体系将人源化的Cas蛋白、gRNA和donor三组分转染至目的细胞,产生高效同源重组,HDR高达49%,实现单克隆纯合子交付。


➢稳转株

赛业生物优化升级了转染载体系统,凭借多年细胞生物学经验,建立了一套成熟稳定的基因过表达实验体系,能提供THP-1稳定表达外源基因或RNA干扰元件的稳定Cell Pool或单克隆细胞株,可获得蛋白高表达10倍以上。


基因编辑注意事项

● 细胞转染前确保状态圆亮活率较高,细胞密度70%左右

● 转染前轻轻吹散聚团的细胞

● 转染后需等细胞状态恢复正常再进行操作。


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