【动物模型】缺血性脑卒中模型制备及评价

学术   2024-08-02 12:08   北京  


缺血性脑卒中模型


       根据《中国脑卒中防治报告(2023)》,我国40岁及以上人群脑卒中现患人数达1242万,且发病人群呈年轻化。我国平均每10秒就有1人初发或复发脑卒中,每28秒就有1人因脑卒中离世;幸存者中,约75%留下后遗症、40%重度残疾,病患家庭将因此蒙受巨大的经济损失和身心痛苦。1990年到2017年中国34个省份地区(包括港澳台)居民第一大死亡原因,是中风(脑卒中)


MCAO,即大脑中动脉闭塞,通过阻断颈内动脉及其分支,且阻断翼腭动脉,以切断颅外来源的侧副循环血流。机械性阻断大脑中动脉发出处的血供。建立大脑中动脉缺血模型。

       为了研究缺血性脑卒中的发病机制,更好地预防和治疗缺血性脑卒中,建立合适的动物模型至关重要。线栓法造模的优点在于避免了开颅手术,可控制再灌注时间,便于实验研究。


实验方法:

大鼠在实验前一天禁食一晚,麻醉后呈仰卧位固定于手术板上,颈部纵行切口约3cm


1)暴露并钝性游离颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA),


2)于颈总动脉(CCA)近心端打活结暂时阻断血供,颈外动脉(ECA)打双结并在双结中间用显微剪剪开小口穿入线栓,从双结中间离断颈外动脉(ECA),调整线栓方向使之进入颈内动脉(ICA)


3)以颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)分叉处为参考位置,线栓插入到预设刻度,感到阻力,提示线栓头部已到达大脑中动脉(MCA),打结固定线栓。


4)缺血时间30-90min,将线栓拔出,松掉颈总动脉活结,完成。


评价方法:

一、动物活体经功能检测

1、神经功能评分:以Longa5分法为评分标准 有视频

0分   无神经 缺 损症 ;

1分   提尾时瘫侧前肢 内收 ,不能全伸直 ;

2分   向瘫侧旋转 (如视频所示)

3分   行走时向瘫侧倾倒 ,

4分   不能行走或昏迷 。

结果:术后24小时进行评分,1-3分 为有效模型 。4分、0分为无效。



2、激光散斑血流灌注成像检测

       激光散斑血流成像仪基于激光散斑对比分析技术,可对大面积组织进行实时的血流动态成像监测,可为待测组织提供实时动态监测曲线和血流视频记录。

3、行为学辅助评价方法:

转棒疲劳仪检测实验  

前肢(四肢)抓力检测

水迷宫测试

规避实验

贴纸去除实验


二、动物活离体组织检测

1、TTC染色

原理:与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色,而缺血组织内脱氢酶活性下降,不能反应,故不会产生变化呈苍白。取血后立即从左心室插管 ,快速灌注生理盐水冲洗2min,断头取脑作TCC染色 ,将大脑从前往 后切成 5-7个冠状切片 ,片厚度约为1.8mm,用1% TTC于37℃染色10min后 ,用4%多聚甲醛固定后应用扫描仪进行扫描。并用分析软件进行分析。

2、其他检测


实验动物模型构建中心
介绍各类人类疾病动物模型的构建方法及经验、动物实验方案设计、相关检测方法等。
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