​竞争法胶体金,不消线怎么办

文摘   2025-01-09 11:31   广东  

在竞争法中,标记的抗原(或抗体)和样本中的待测抗原(或抗体)竞争有限的抗体(或抗原)结合位点。如果样本中待测物含量高,标记物结合到检测线上的就少,显色就浅甚至不显色(即消线);反之,如果样本中待测物含量低,标记物结合到检测线上的就多,显色就深。

1、那么竞争法胶体金不消线的原因有那些呢

1)抗体影响因素

当抗体亲和力太强时,会导致胶体金集中堵在前面。就像一群抓气球能力超强且不松手的孩子(把包被的抗体看成孩子,胶体金看成气球),前面的气球(胶体金)越来越多直至拥挤,后面的抗体反应时间都没了,使得再过来的胶体金直接被水冲走,从而影响消线情况 。

如果抗体包被量太高,会造成类似一群人哄抢气球的情况,前面的抗体把胶体金大量结合,后面的抗体就没有机会与胶体金结合,影响消线。不过,对于一些项目,如果降低包被量,虽然可能改善线条不均或不消线的情况,但可能达不到半定量甚至定性的要求。

还有就是可能存在抗体的特异性不强,与其他物质发生非特异性结合,这样即使在样本中待测物含量高的情况下,标记物仍然会结合到检测线上,导致不消线。例如在检测抗生素残留时,如果抗体对其他类似结构的物质也有结合能力,就可能干扰正常的消线反应。

2)抗原相因素的影响,

抗原纯度和活性,若抗原纯度不够,其中混有杂质,这些杂质可能会干扰抗原与抗体的正常结合。比如在检测真菌毒素胶体金时,如果抗原不纯,可能会导致竞争反应无法正常进行,使得T线不消线。而且如果抗原活性受到影响,例如在保存或制备过程中部分失活,也会影响消线效果。

抗原浓度,在竞争法中,样本中的抗原浓度与标记抗原竞争结合抗体。如果样本中抗原浓度设置不合理,如过高或过低,都可能影响消线。过高的抗原浓度可能超出了检测体系能够正常处理的范围,导致消线失败。

3)检测体系因素影响

流速问题,如果流速过快,抗原 - 抗体反应可能不充分。例如在抗原抗体反应时间太长,直接爬水上去阳性不消线的情况中,若流速没有控制好,就可能导致消线异常。而如果流速过慢,也可能会使反应体系发生一些非特异性的变化,影响消线效果 。

膜的特性:检测所用的NC膜等膜材的性质会影响消线。如果膜的孔径不合适,可能会阻碍抗原 - 抗体的结合或者胶体金的扩散。例如膜的孔径过小,会限制胶体金的移动,使得标记的抗原或抗体不能有效地与膜上包被的抗体或抗原结合,从而导致不消线。

样品垫的影响:样品垫的配方如果不合适,会影响样品的扩散速度和效果。比如表面活性剂的浓度如果不适当,可能无法很好地促进反应和加深显色,进而影响消线。当表面活性剂浓度过低时,样品在样品垫上的扩散速度慢,可能导致反应不充分;浓度过高可能会产生非特异性吸附等问题,影响消线 。

2、解决竞争法胶体金不消线的策略

如果是抗体亲和力过强的问题,可以尝试筛选亲和力更合适的抗体。通过大量的实验筛选,找到既能保证特异性结合,又不会因为亲和力过强而导致胶体金聚集堵在前面的抗体。对于抗体包被量过高的情况,可以通过实验优化包被量。采用梯度稀释的方法,在保证能够达到检测要求(如定性或半定量)的前提下,找到最低的有效包被量,以改善消线情况。

通过预实验确定合适的抗原浓度范围。在检测样本时,确保样本中的抗原浓度在这个合理范围内。如果是检测未知浓度的样本,可以采用稀释等方法,使样本中的抗原浓度符合检测体系的要求。

根据检测体系的特点,确定最佳的流速。可以通过调整试纸条的结构,如样品垫、结合垫和NC膜之间的组合方式,或者使用不同孔径的膜来控制流速。例如,对于容易不消线的检测项目,可以适当降低流速,增加抗原 - 抗体的反应时间。对不同的膜材进行筛选,选择孔径合适、对胶体金和抗原 - 抗体结合影响小的膜。可以通过对比不同厂家、不同型号的膜材,找到最适合的膜用于检测。特别是表面活性剂的浓度,要通过实验确定最佳浓度。可以从低浓度到高浓度设置一系列的表面活性剂浓度,观察对消线的影响,找到既能促进样品扩散又不会产生非特异性吸附的最佳浓度。

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