（接上期）
5. 病毒检测
可以通过病毒的蛋白，核酸以及病毒分离进行PRRSV的鉴定。
Immunohistochemistry (IHC) and in-situ hybridization (ISH)免疫组化和原位杂交
PRRSV抗原或核酸可分别通过免疫组化和原位杂交进行检测。病毒检测与病理变化之间的关系可以通过IHC或ISH与组织病理学的结合分析来建立。
病毒分离和滴度测定
可以通过CL-262和MARC-145细胞进行病毒的分离，不过一些PRRSV-1和类欧洲毒株只能使用肺泡巨噬细胞进行分离。
由于在1-4天内发生的细胞病变效应并不总是清楚的，病毒分离通常还需要通过RT-PCR、IPMA或IFA(7天时最高敏感性)来确认。病毒滴定可以使用连续稀释的样品的方法进行测定。
检测病毒基因组
Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP)先执行酶切多样性
将ORF5的基因片段用3种限制性酶进行酶切后，可以出现3种不同的基因片段组合，根据酶切产物的差异性可以进行病毒的分型；但是也有一些不同的毒株可以产生同样的限制性酶切片段。
因此，测序比RFLP进行病毒的分离鉴定要更准确些。
Conventional reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)常规RT-PCR
RT-PCR和ELISA是最常用的检测方法，其敏感性比病毒分离高，但是因为检测的是基因片段，所以RT-PCR阳性也不能说明存在活病毒。
通常RT-PCR检测的是ORF5和ORF7基因，但是由于PRRSV基因的多样性在连续不断的增加，这就导致检测的敏感性差异很大，也就需要我们不断的对引物进行更新，从而使假阴性结果降到最低。
荧光探针检测是基于对基因组特定片段的检测、扩增和定量。与传统的RT-PCR不同，它是在PCR反应的每个循环中实时检测和测量目标片段的扩增情况，而不是在反应结束时进行。
简而言之，用荧光报告分子标记的核苷酸可以在探针与其互补序列杂交后进行检测。
实时RT-PCR仪负责测量扩增过程中荧光信号的积累，可以对目标片段进行定量和半定量检测。
当需要精准定量时，则必须将同样的毒株进行连续稀释制定出标准线。
Real-time RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR
RT-PCR检测结果显示的是Ct值，Ct值的大小与样品中核酸的含量成反比。
可以对样品的拷贝数进行定量或者半定量测定。
对于PRRSV而言，RT-PCR检测的Ct值一般在26 cyc左右，但是不同日龄的猪群感染PRRSV后其Ct值差异较大，比如，新生仔猪产生PRRSV病毒血症时Ct值可以达到17-18，而成年猪则只有26左右。
总的来说，当Ct值＞37后就说明生物学意义很小或者没有意义了。
弱毒疫苗免疫后产生的病毒血症在进行RT-PCR检测时，Ct值与疫苗毒株和猪只日龄有关，一般在30-35之间。
与传统的RT-PCR一样，荧光定量RT-PCR也缺乏统一的检测性能评估标准。目前，部分国家有商品化的荧光定量RT-PCR检测试试验，但是，同时另外一些实验室则只有自制的检测方法。
与常规RT-PCR一样，检测结果会因为实验室的专业知识、实验标准、技术和更新情况的不同可能存在假阳性，
不管怎么说，荧光定量RT-PCR的敏感性都等于或者高于传统的RT-PCR，当然它同样也受到引物和探针与目标基因的匹配程度影响。显然，它还可以用在毒株的鉴别和分类。
（未完待续）
