细胞的体外培养需要依附在人工附着物上,大多数脊椎动物细胞在人工附着物上会呈现为单层生长的状态。
所谓的人工附着物,就是常见的多孔板、培养瓶、培养皿。
用什么类型的附着物来培养细胞,是有什么依据的呢?这一期内容就讲讲这个话题。
基本概念
从材料分类上看,常见的细胞培养附着物分为一次性的塑料和玻璃。
先说玻璃,成本低、可重复使用,透光性好,但由于其清洗过程复杂,不易保存,现在已逐渐被一次性塑料取代了。
一次性塑料的主要成份是聚丙乙烯,由人工合成,质地均匀,产量大成本低,能为细胞提供一个良好的生长表面。
这里有一个小细节,有的塑料培养器皿会标注“已表面处理“,这是什么意思呢?
因为聚丙乙烯生产好以后,其表面是疏水性的,这不利于细胞贴壁生长,因此,需要进行特殊的工艺处理,例如射线照射、电离辐射,这样处理过的表面细胞才能更好的贴在上面生长。
选择器皿的原则
选择用多孔板培养细胞还是培养瓶培养细胞,是根据你培养细胞的目的来决定的。
如果培养细胞的目的是通过细胞倍增,最终获得大量细胞或细胞分泌物,则应该使用培养瓶、培养皿来培养细胞;
如果目的是为了进行微量的、多次的重复实验来分析细胞或细胞产物,则应该使用多孔板来培养。
确定培养目的以后,应该根据具体情况选择不同规格的器皿。以下分类说明。
1 选择培养瓶、培养皿培养细胞
首先,根据期望获得的细胞产量来选择,培养瓶是通过表面积来命名的,例如T25、T75、T175,数字就是表面积,25就是25cm2,如此类推;
培养皿是按照其直径来命名的,例如3.5cm、9cm。以下,是按照不同规格的培养器皿所能培养的细胞数量绘制的参考图,有兴趣的同学可以保存下来以后用。
其次,根据实验操作熟练程度来选择,培养皿的操作比较方便,不管是换液、传代、还是收获细胞,但因为其开口很大,所以容易污染,如果你是新手,不建议直接用培养皿养细胞。
最后,如果选择培养瓶培养,还应该尽量选择有斜肩设计、带透气孔瓶盖的型号。
前者可以避免培养瓶平放后,过多的培养基接触瓶盖造成污染,后者可以保持内外的二氧化碳浓度一致。
如果瓶盖不透气,那在放进培养箱时,应拧松一圈,以便内外气体能顺利交换。
2 选择多孔板培养细胞
首先,也是要判断你的实验需要多少细胞来进行分析,以此来选择多孔板的规格。大家同样可以参照上面的图表。
有极个别的孔板,孔底部是锥形底或圆底,这种规格的多孔板适用于非组织型的细胞培养,对于大多数贴壁生长的细胞来说不适合。
选择好合适的孔板后,在培养阶段,有2点注意事项:
A 多孔板会带板盖,但其密封性不好,在培养箱内会造成边缘的孔位蒸发效率过高,进而影响细胞生长速率。
有条件的同学,可以在盖上板盖后在缝隙处贴一圈封口膜。或者舍弃边缘孔位,并采用添加培养基来代替。
B 当细胞种入孔内以后,不应该再进行过多的震动,例如晃动、抖动培养板,而应该轻缓的放入培养箱中。
如果培养箱由多人共用,还应该考虑大家频繁开关箱门、拿放孔板造成的震动,这些不利因素都应该尽量减少。
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