1 血球计数板的构造
图1 血细胞计数板（左）；16×25规格的计数室（右）
2 血球计数板的规格
图2 两种规格的计数室放大后的图像
3 加样
4 血球计数板的计数
4.2 用2mm×2mm×0.1mm，16×25或25×16规格的计数室 加样后，稍待片刻，待细胞全部沉降到技术室底部后，将计数板放于载物台中央，寻找技术室，取计数室的左上、右上、右下、左下4个中格（即对应图2中1、4、16、13四个中格，共计100个小格）进行计数。计数重复3次，算出每个小格内细胞数目的平均值。计算公式为：细胞个数/1mL=每个小格内细胞数目的平均值×400×2.5×103×稀释倍数；若用2mm×2mm×0.1mm，25×16规格的计数室 ，加样后，在计数室的左上、右上、右下、左下和中部的5个中格（即对应图2中1、5、25、21、13五个中格，共计80个小格子）进行计数。计数重复3次，算出每个小格内细胞数目的平均值。计算公式为：细胞个数/1mL=每个小方格细胞数目的平均值×400×2.5×103×稀释倍数（公式推导如图3）
图3 1mL内细胞个数的推导公式
备注：上述公式推导中，每个小格内细胞平均数是指：16×25规格通过100个小格计算出的每个小格内细胞平均数；或25×16规格，通过80个小格计算出的每个小格细胞平均数。
5 典型例题
在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，利用1mm×1mm×0.1mm，25×16规格计数板对微生物细胞进行直接计数，如下图。某同学操作时将1mL 酵母菌样品加 99mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。回答下列问题：
（1）在实验中，某学生的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线。请指出该同学实验操作中的 3 处错误并改正：①应将试管轻轻震荡几次再吸取酵母菌培养液进行计数；②应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养；③应连续七天，每天观察、取样计数并记录数据。
（2）在实验前应该对计数板、吸管等器具进行灭菌处理。
（3）如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应采取的措施是稀释处理。
（4）如果观察到上图所示 a、b、c、d、e 5 个中格内共有酵母菌 48 个，则上述 1mL 酵母菌样品中约有酵母菌2.4×108个；要获得较为准确的数值，减少误差，你认为该怎么做？多次计数，求平均值。
（5）计数完毕，取下盖玻片，用清水将血球计数板冲洗干净， 不能 （填写 能或不能）用硬物洗刷。
6 血球计数板使用注意事项
（1）血球计数板计数法的缺点是不能区分死菌和活菌，因此计数结果与待测样品中实际含菌数量相比往往偏高。为了避免把死菌计数在内，可以对待测菌体用台盼蓝染色，被染成蓝色的，为死菌。反之，为活菌；
（2）应将试管轻轻震荡或倒转几次再吸取酵母菌培养液进行计数；
（3）若培养一段时间后而密度过大，计数前要进行稀释一定的倍数；
（4）压在方格线上的细胞只计左线和上线的细胞，目的是防止重复计数；
（5）酵母细胞若有黏连，要数出团块中的每一个细胞；
（6）出芽酵母的芽体体积若超过细胞体积的1/2，则算作独立的个体；
（7）计数总数不少于300个细胞；
（8）计数时应不时地调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。
来源：网络
收集：“树人”老师
