基因表达检测|一站式解决方案

2024-09-09 17:28   天津  
图1. 基因表达检测的实验流程


RNA提取

RNA是分子生物学研究的重要对象之一,从样本中获得高质量的RNA是后续RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库构建等分子生物学研究的基础。

图2. 中心法则示意图

RNA提取是整个实验的第一步,只有提取出纯度高、完整性好的RNA才能为后续的研究提供良好的开端。所以从样本中提取RNA的过程是分子生物学中的一个重要步骤。

RNA提取核心原则:细胞裂解去除非核酸污染物

图3. RNA提取的核心原则
RNA提取方式一般分为有机溶剂抽提法、硅胶膜离心柱法和磁珠法, 根据不同的提取方法,达达为大家准备了不同的解决方案。
01  有机溶剂抽提法

提取RNA的经典方法在匀质化或溶解样品中,TsingZol试剂可保持RNA的完整性,同时又能破坏细胞并溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相,RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可从中间相沉淀得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到RNA。

图4. TsingZol总RNA提取效果展示

02  硅胶膜离心柱法



RNA提取中被广泛使用的方法。通过特殊硅基质吸附材料,能够特定吸附DNA,而RNA和蛋白质顺利通过,然后利用高盐低PH结合核酸,低盐高PH值洗脱,来分离纯化核酸。

图5. 硅胶膜离心柱法提取RNA效果展示
03  磁珠法

RNA批量提取常用的一种提取方法。利用表面带有亲核基团的磁性珠子捕获核酸分子,再通过洗涤和洗脱步骤将纯化的核酸分子从磁珠上释放出来。

图6. 磁珠法RNA提取流程

磁珠法提取需要搭配特定的器材如磁力架或者核酸提取仪才能完成提取实验。

今天达达给大家推荐一款GeneEX16全自动核酸提取仪(货号:PI003,这是一款高效核酸提取自动化设备,专为简化和提升核酸提取工作流程而设计。能够自动执行核酸样品在预处理后的多个关键步骤,包括样品裂解、杂质去除、加热、溶解洗脱等。搭配使用通用型RNA提取试剂盒(磁珠法)(货号:DZN308-96)可实现动植物组织、细胞、血液、土壤等各类样品的RNA的自动化提取。

视频. GeneEX16全自动核酸提取仪操作演示


逆转录
逆转录是以提取的RNA单链为目标合成cDNA双链的过程,是下一步qPCR模板准备的必要环节。cDNA是以RNA为模板合成的,其与基因组DNA的区别在于缺少了转录剪切掉的内含子部分,因此以cDNA为模板设计的引物会有很大概率与基因组DNA结合而引起非特异性扩增。当提取的总RNA或mRNA中有较多的基因组DNA残留时,在进行逆转录实验前的去除基因组DNA步骤就很有必要了,这也是逆转录实验一般都要分两步做的原因。

图7. 转录与逆转录

人生不能得过且过,方法总比困难多。为了解决逆转录实验过程复杂、移液繁琐等问题,达领生物推出的SynScript® Ⅲ一管式逆转录预混液(去基因组)(货号:DLR102)。该预混液中包含了SynScript® III RT7逆转录酶、热敏dsDNase、反应缓冲液等成分,可一步完成基因组去除与逆转录,大幅提高逆转录效率和反应速率。

图8. SynScript® Ⅲ一管式逆转录预混液(去基因组)

图9. DLR102反应体系与程序

图10. 不同品牌逆转录产品对比测试结果


qPCR

实时荧光定量PCR,也称qPCR(Real-time Quantitative PCR),是一种实时监控核酸扩增的技术。qPCR可以用于定性(判断一段序列的有无),也可以用于定量(确定DNA拷贝数)。如果你正在为qPCR实验而犯愁,今天达达给推荐一个课程“实时荧光定量PCR从入门到精通”,手把手带玩转qPCR实验。

图11. 实时荧光定量PCR的检测原理

qPCR是最后的检测步骤,试剂的好坏决定了能否得到想要的结果。通常大家关注是灵敏度,Ct值能否达到更低的数值,以及特异性,溶解曲线会不会杂乱多峰。 

图12. 达领qPCR试剂的效果展示

达领生物秉承“科技触达,引领未来”的品牌理念,对产品质量持续优化,不断地推陈出新,致力于为广大科研用户提供更高效稳定、高性价比的实验产品和解决方案。


相关产品推荐


达领生物
达领生物是擎科生物集团创立的新兴品牌,专注研发及生产生物试剂、IVD酶原料与仪器设备。
 最新文章