选对酶,选好酶,PCR实验事半功倍!

2024-06-28 15:57   天津  
PCR扩增的关键之一是DNA聚合酶,它可以催化底物dNTPs聚合生成DNA子链。根据DNA聚合酶的热稳定性、扩增速度、保真度、灵敏度和特异性等特点,可以将其分为Taq DNA聚合酶、高保真DNA聚合酶、热启动DNA聚合酶等等。要想PCR一步到位,选对DNA聚合酶是重中之重。

DNA聚合酶催化DNA合成

第一步

了解DNA聚合酶的特性


市面上的DNA聚合酶分类大部分是依据不同的DNA酶特性进行划分的,不同的特点具有不同的功能,适合特定的应用场景。一般来说,DNA聚合酶特性包括以下几种:

01
热稳定性

DNA聚合酶能够耐受高温的能力,不同的DNA聚合酶的热稳定性差异较大。

02
保真度

部分DNA聚合酶具有 3'-5' 核酸外切酶活性,能够校正错配碱基,这类DNA聚合酶也被成为高保真酶。保真度常以错配率体现。

03
灵敏度

DNA聚合酶对低拷贝或微量模板的扩增能力,可通过检出率体现。

04
特异性

DNA聚合酶在PCR过程中只扩增目的片段,减少非特异性扩增的能力。常通过抗体法化学法等方式对DNA聚合酶进行修饰以提升酶的特异性。

05
扩增速度

DNA聚合酶向DNA新链中掺入核苷酸的速率,高扩增速率的DNA聚合酶可加快整体实验时间。

第二步

明确实验需求


了解到DNA聚合酶不同的特性之后,我们需要进一步确定自己的实验目的,根据具体的实验需求来选择合适的DNA聚合酶。

1.常规PCR实验


针对一些只需要检测 PCR 产物或估算其大小,例如对小鼠进行基因分型筛选阳性克隆等。对于这种类型的常规 PCR 分析,选择常规的 DNA 聚合酶(如 Taq DNA 聚合酶)来确认目的 DNA 存在与否即可。

针对阳性克隆鉴定,达领生物推出了“让你快人一步的V5菌鉴酶”(货号:DLP601/TSE0601),三步完成菌落鉴定,真正做到快速简便灵敏


2.对序列正确性要求高的PCR实验


如果下游实验涉及克隆、点突变、二代测序(NGS)SNP分析,那么序列准确性是至关重要的。为了确保准确进行 DNA 拷贝,此时需要选择高保真 DNA 聚合酶。保持序列准确的 DNA 聚合酶,2x T8 High-Fidelity Master Mix(货号:DLP201/TSE111) 是更好的选择,具有高保真度,准确度是 Taq DNA 聚合酶的60倍,并且产率高、扩增速度快。


3.对特异性要求高的PCR实验


PCR实验过程中,有时会出现由于序列限制等原因导致引物无法继续优化,引起非特异性扩增产物出现。为了实现特定目标条带的高产率扩增,建议选择热启动 DNA 聚合酶,2×TSINGKE ® Master Mix(货号:TSE003)。该类DNA聚合酶活性在预变性(95℃)条件下才被激活,可抑制低温条件下由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。适用于多重 PCR高通量PCR分析。

4.需要对粗品直接扩增的PCR实验


对于样品份数繁多现场采样分析样本量有限时或者其他需要快速检测的实验,推荐选择直扩的DNA聚合酶。这类酶无需提取DNA即可实现PCR扩增。但这对于酶的耐杂性buffer的兼容性以及裂解液对样本的裂解能力有较高要求。因此,针对不同的样本,可以有选择性地使用对应的直扩试剂盒。

直扩PCR反应示意图

第三步

选择优质的DNA聚合酶产品



除了以上提到的某些DNA聚合酶产品之外,达达还为大家准备了很多其他类型的DNA聚合酶产品,供大家参考挑选,祝愿每一位科研战士都能在达达的帮助下选对酶、选好酶,事半功倍地完成PCR扩增实验!

达领生物
达领生物是擎科生物集团创立的新兴品牌,专注研发及生产生物试剂、IVD酶原料与仪器设备。
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